一、项目基本情况

　　项目名称：技术测试与分析服务

　　采购方式：竞争性谈判

　　预算金额：9.5万元（人民币）

　　最高限价（如有）：9.5万元（人民币）

　　采购需求：详见附件

　　合同履行期限：/

　　本项目( 不接受 )联合体投标。

　　二、申请人的资格要求：

　　1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定；

　　2.本项目的要求：（1）熟悉了解我站水生动物疫病监测、病原菌耐药性普查等工作。（2）供应商须提交以下资质证明文件：①供应商须在中华人民共和国境内注册，具有独立法人资格，并提供合格有效的法人营业执照副本复印件、税务登记证副本复印件、组织机构代码证副本复印件。若已三证合一的企业可只提供营业执照副本复印件。②提交项目报价单。③具有采购服务内容的技术服务、开发等资质证明文件。

　　三、响应文件提交

　　截止时间：2023年7月2日 17点30分（北京时间）

　　地点： (略) 水产技术推广总站（ (略) 鼓楼区西洪路5 (略) 水产技术推广总站五楼办公室）

　　四、开启

　　时间：2023年7月3日 10点00分（北京时间）

　　地点： (略) 水产技术推广总站（ (略) 鼓楼区西洪路5 (略) 水产技术推广总站四楼会议室）

　　五、公告期限

　　自本公告发布之日起5天。

　　六、其他补充事宜

　　无

　　七、凡对本次采购提出询问，请按以下方式联系。

　　名 称： (略) 水产技术推广总站　　　　　

　　地址： (略) 鼓楼区西洪路555号　　　　　　

　　联系方式：陈先生 0591-*　　　　　　

　　 (略) 水产技术推广总站

　　2023年6月27日

　　附件

　　一、采购需求

　　序 号 内 容 规 格 数 量

　　1 DNA测序,PCR测序 RXN 3000

　　2 高通量全转录组测序 TEST 2

　　3 DNA合成,HAP合成11-25个碱基 2OD BP 2000

　　4 DNA合成,PAGE合成11-25个碱基 2OD BP 4000

　　5 DNA合成,5`端修饰 2OD PCS 2

　　6 DNA合成,双标记修饰 2OD PCS 20

　　7 ELISA保证型多克隆抗体制备服务 Tex 1

　　8 Western blot保证型单克隆抗体制备服务 Tex 1

　　9 酶联免疫吸附实验服务 Tex 1

　　10 细胞增殖检测，MTT/CCK-8 EA 1

　　11 细胞凋亡检测，TUNEL法 EA 1

　　二、服务内容、形式和要求

　　1.服务内容

　　1.1 测序：包括PCR产物、菌液和质粒测序服务。

　　1.2 转录组测序：对*方提供的样品进行RNA提取，通过电泳检测RNA质量，合格后进行文库构建，用illumina平台进行测序，读长方式：2×150bp ；每个样品数据量：6G。

　　1.3 引物合成：包括普通PCR引物合成（PAGE纯化，碱基范围11～59bp，规格1～4OD）；荧光定量PCR引物合成（HPLC纯化，碱基范围11～59bp，规格2OD）；引物修饰（荧光标记）（规格2OD，包括5",3"FAM、5"HEX、5"TET、5",3"Cy3、5",3"Cy5、3"BHQ1 / 3"BHQ2等标记）；引物修饰（两端DNA修饰探针）（规格2OD，包括5"FAM & 3"BHQ1、5"ROX & 3"BHQ2、5"Cy5 & 3"BHQ2、5"HEX & 3"BHQ1、5"TET & 3"BHQ1、5"TET & 3"TAMRA、5"JOE & 3"BHQ1、5"VIC & 3"BHQ1等标记）。

　　1.4 抗体制备：ELISA效价保证多抗制备，免疫2只新西兰大白兔，血清采集及protein A纯化，抗体ELISA检测：效价>1:64000；Western blot保证型单克隆抗体制备服务，免疫1-5只Balb/c小鼠，免疫小鼠血清检测：ELISA、Dot blot或Western blot，细胞融合，杂交瘤制备及鉴定，腹水生产及纯化（1株杂交瘤）。

　　1.5 免疫学分析：酶联免疫吸附测定法（ELISA）将已知抗原或抗体吸附在固相载体上，通过抗原抗体特异性结合吸附待测样品中的抗体或抗原后，加酶标抗体（酶与抗体或抗原结合后，既不改变抗体或抗原免疫反应的特异性，又不影响酶本身活性）和底物后，在相应酶底物的作用下生成有色物质，其颜色深浅与标记物中相应的抗体或抗原的含量呈正比，由此可测定抗原或抗体的含量。

　　1.6 细胞分析：采用TUNEL进行细胞凋亡检测，对完整的单个凋亡细胞核进行原位染色，准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，检测出极少量的凋亡细胞；采用MTT法进行细胞增殖检测，四*基偶氮唑盐（MTT）作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色的针状*瓒（Formazan）结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二*基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其吸光度OD值，OD值的高低可间接反映活细胞的数量及其活性。

　　2. 服务形式和要求

　　2.1 测序

　　*方向*方可提供质粒、菌液、PCR产物测序服务，服务周期12小时-48小时并提交测序数据给*方，*方保证每次正常的3730测序反应能读取不少于800碱基，若出现以下情况的*方按对应的处理方案解决。

　　1）对由于*方样品本身的原因(如GC rich、连续单一重复碱基Poly(A)、Poly(T)及其它特殊结构等造成测序反应终止或信号骤降，如待测样品中存在不只一个测序引物的结合位点而造成套峰现象等)造成测序失败或不能读到800碱基的测序反应，*方仍然正常收费；

　　2）如遇到信号衰减的情况，*方保证调整反应条件再测一次，如测序结果没有好转，则两次按一次收费，如正常则对正常的一次收费；

　　3）对于不知原因的测序反应没有信号的样品，*方会至少进行两次实验，如果仍然失败,*方会终止实验并通知*方，不收费，*方可以重新送样测序；

　　4）如遇无法判断的原因导致无法正确读取所承诺的测序长度，双方友好协商解决。

　　2.2 转录组测序

　　1）*方对样品质量进行检测，对样品进行电泳胶图、紫外分析仪定量，如有问题将与*方及时沟通并协商样品处理事宜；

　　2）*方对检测合格的样品进行文库构建；

　　3）对处理完成的样品进行文库质检与定量混合；

　　4）对样品进行高通量测序；

　　5）对测序数据进行分析；

　　6）交付完整的实验报告及原始数据。

　　2.3 引物合成

　　1）*方按*方要求提供的引物序列，为*方合成引物并按要求提供引物实物及相应的包装，合成过程中双方不可随意更改引物序列。*方收到*方引物序列之日起，普通PCR引物合成则1-2个工作日内交货给*方；荧光定量PCR引物合成、荧光标记、两端DNA修饰探针则4-5个工作日内交货给*方，同时*方向*方提供其在完成引物合成过程中的实验报告及全部数据资料；

　　2）*方保证合成质量，合成序列准确、纯度合格。如果遇到*方使用期间有任何问题，经过*方核实，*方将免费重新合成一次，但不承担额外补偿。

　　2.4 抗体制备

　　1）根据*方提供抗原信息（可提供抗原序列信息或NCBI登录号）或抗原蛋白进行ELISA效价保证多抗制备，交付300μl免疫前血清、剩余裸肽或蛋白、2mg以上纯化后抗体（来源于1只兔子），以及完整的项目结题报告和免疫原的ELISA验证结果；

　　2）根据*方提供的抗原及 抗体制备信息采集表进行免疫原western blot保证型，交付1株杂交瘤细胞；2mg抗体（1株杂交瘤细胞）以及完整的项目结题报告和免疫原的WB验证结果。

　　2.5 免疫学分析

　　1）*方根据*方提供样品及样本信息表中*方填写的内容进行样品的上样做酶联免疫吸附实验服务，*方如有特殊代测要求需在”样本信息表”中备注；

　　2）*方需提供样品。*方代测之后提供客观真实的电子版代测数据结果，如有跟*方预期结果不一致之处，*方不承担相关责任。

　　3）若实验进展得不顺利，*方应及时和*方沟通，由双方协商实验进行一些调整（延时或者更改实验方案）；

　　4）实验完成后，*方将实验结果、原始数据等材料通过电子邮件形式发送*方，实验过程中出现的问题**双方友好协商。

　　2.6 细胞分析

　　1）*方根据*方提供样品及样本信息表中*方填写的内容进行TUNEL细胞凋亡检测；

　　2）*方对*方所做项目的内容承担保密义务，未经*方书面许可，不得泄露或者私自将数据结果转让他人，应国家主管机关或有权机构要求除外；

　　3）*方会慎重对待*方提供的样品，但对于实验过程中的样品损耗（包括实验失败造成的样品损耗），*方不承担赔偿责任。

　　一、项目基本情况

　　项目名称：技术测试与分析服务

　　采购方式：竞争性谈判

　　预算金额：9.5万元（人民币）

　　最高限价（如有）：9.5万元（人民币）

　　采购需求：详见附件

　　合同履行期限：/

　　本项目( 不接受 )联合体投标。

　　二、申请人的资格要求：

　　1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定；

　　2.本项目的要求：（1）熟悉了解我站水生动物疫病监测、病原菌耐药性普查等工作。（2）供应商须提交以下资质证明文件：①供应商须在中华人民共和国境内注册，具有独立法人资格，并提供合格有效的法人营业执照副本复印件、税务登记证副本复印件、组织机构代码证副本复印件。若已三证合一的企业可只提供营业执照副本复印件。②提交项目报价单。③具有采购服务内容的技术服务、开发等资质证明文件。

　　三、响应文件提交

　　截止时间：2023年7月2日 17点30分（北京时间）

　　地点： (略) 水产技术推广总站（ (略) 鼓楼区西洪路5 (略) 水产技术推广总站五楼办公室）

　　四、开启

　　时间：2023年7月3日 10点00分（北京时间）

　　地点： (略) 水产技术推广总站（ (略) 鼓楼区西洪路5 (略) 水产技术推广总站四楼会议室）

　　五、公告期限

　　自本公告发布之日起5天。

　　六、其他补充事宜

　　无

　　七、凡对本次采购提出询问，请按以下方式联系。

　　名 称： (略) 水产技术推广总站　　　　　

　　地址： (略) 鼓楼区西洪路555号　　　　　　

　　联系方式：陈先生 0591-*　　　　　　

　　 (略) 水产技术推广总站

　　2023年6月27日

　　附件

　　一、采购需求

　　序 号 内 容 规 格 数 量

　　1 DNA测序,PCR测序 RXN 3000

　　2 高通量全转录组测序 TEST 2

　　3 DNA合成,HAP合成11-25个碱基 2OD BP 2000

　　4 DNA合成,PAGE合成11-25个碱基 2OD BP 4000

　　5 DNA合成,5`端修饰 2OD PCS 2

　　6 DNA合成,双标记修饰 2OD PCS 20

　　7 ELISA保证型多克隆抗体制备服务 Tex 1

　　8 Western blot保证型单克隆抗体制备服务 Tex 1

　　9 酶联免疫吸附实验服务 Tex 1

　　10 细胞增殖检测，MTT/CCK-8 EA 1

　　11 细胞凋亡检测，TUNEL法 EA 1

　　二、服务内容、形式和要求

　　1.服务内容

　　1.1 测序：包括PCR产物、菌液和质粒测序服务。

　　1.2 转录组测序：对*方提供的样品进行RNA提取，通过电泳检测RNA质量，合格后进行文库构建，用illumina平台进行测序，读长方式：2×150bp ；每个样品数据量：6G。

　　1.3 引物合成：包括普通PCR引物合成（PAGE纯化，碱基范围11～59bp，规格1～4OD）；荧光定量PCR引物合成（HPLC纯化，碱基范围11～59bp，规格2OD）；引物修饰（荧光标记）（规格2OD，包括5",3"FAM、5"HEX、5"TET、5",3"Cy3、5",3"Cy5、3"BHQ1 / 3"BHQ2等标记）；引物修饰（两端DNA修饰探针）（规格2OD，包括5"FAM & 3"BHQ1、5"ROX & 3"BHQ2、5"Cy5 & 3"BHQ2、5"HEX & 3"BHQ1、5"TET & 3"BHQ1、5"TET & 3"TAMRA、5"JOE & 3"BHQ1、5"VIC & 3"BHQ1等标记）。

　　1.4 抗体制备：ELISA效价保证多抗制备，免疫2只新西兰大白兔，血清采集及protein A纯化，抗体ELISA检测：效价>1:64000；Western blot保证型单克隆抗体制备服务，免疫1-5只Balb/c小鼠，免疫小鼠血清检测：ELISA、Dot blot或Western blot，细胞融合，杂交瘤制备及鉴定，腹水生产及纯化（1株杂交瘤）。

　　1.5 免疫学分析：酶联免疫吸附测定法（ELISA）将已知抗原或抗体吸附在固相载体上，通过抗原抗体特异性结合吸附待测样品中的抗体或抗原后，加酶标抗体（酶与抗体或抗原结合后，既不改变抗体或抗原免疫反应的特异性，又不影响酶本身活性）和底物后，在相应酶底物的作用下生成有色物质，其颜色深浅与标记物中相应的抗体或抗原的含量呈正比，由此可测定抗原或抗体的含量。

　　1.6 细胞分析：采用TUNEL进行细胞凋亡检测，对完整的单个凋亡细胞核进行原位染色，准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，检测出极少量的凋亡细胞；采用MTT法进行细胞增殖检测，四*基偶氮唑盐（MTT）作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色的针状*瓒（Formazan）结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二*基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其吸光度OD值，OD值的高低可间接反映活细胞的数量及其活性。

　　2. 服务形式和要求

　　2.1 测序

　　*方向*方可提供质粒、菌液、PCR产物测序服务，服务周期12小时-48小时并提交测序数据给*方，*方保证每次正常的3730测序反应能读取不少于800碱基，若出现以下情况的*方按对应的处理方案解决。

　　1）对由于*方样品本身的原因(如GC rich、连续单一重复碱基Poly(A)、Poly(T)及其它特殊结构等造成测序反应终止或信号骤降，如待测样品中存在不只一个测序引物的结合位点而造成套峰现象等)造成测序失败或不能读到800碱基的测序反应，*方仍然正常收费；

　　2）如遇到信号衰减的情况，*方保证调整反应条件再测一次，如测序结果没有好转，则两次按一次收费，如正常则对正常的一次收费；

　　3）对于不知原因的测序反应没有信号的样品，*方会至少进行两次实验，如果仍然失败,*方会终止实验并通知*方，不收费，*方可以重新送样测序；

　　4）如遇无法判断的原因导致无法正确读取所承诺的测序长度，双方友好协商解决。

　　2.2 转录组测序

　　1）*方对样品质量进行检测，对样品进行电泳胶图、紫外分析仪定量，如有问题将与*方及时沟通并协商样品处理事宜；

　　2）*方对检测合格的样品进行文库构建；

　　3）对处理完成的样品进行文库质检与定量混合；

　　4）对样品进行高通量测序；

　　5）对测序数据进行分析；

　　6）交付完整的实验报告及原始数据。

　　2.3 引物合成

　　1）*方按*方要求提供的引物序列，为*方合成引物并按要求提供引物实物及相应的包装，合成过程中双方不可随意更改引物序列。*方收到*方引物序列之日起，普通PCR引物合成则1-2个工作日内交货给*方；荧光定量PCR引物合成、荧光标记、两端DNA修饰探针则4-5个工作日内交货给*方，同时*方向*方提供其在完成引物合成过程中的实验报告及全部数据资料；

　　2）*方保证合成质量，合成序列准确、纯度合格。如果遇到*方使用期间有任何问题，经过*方核实，*方将免费重新合成一次，但不承担额外补偿。

　　2.4 抗体制备

　　1）根据*方提供抗原信息（可提供抗原序列信息或NCBI登录号）或抗原蛋白进行ELISA效价保证多抗制备，交付300μl免疫前血清、剩余裸肽或蛋白、2mg以上纯化后抗体（来源于1只兔子），以及完整的项目结题报告和免疫原的ELISA验证结果；

　　2）根据*方提供的抗原及 抗体制备信息采集表进行免疫原western blot保证型，交付1株杂交瘤细胞；2mg抗体（1株杂交瘤细胞）以及完整的项目结题报告和免疫原的WB验证结果。

　　2.5 免疫学分析

　　1）*方根据*方提供样品及样本信息表中*方填写的内容进行样品的上样做酶联免疫吸附实验服务，*方如有特殊代测要求需在”样本信息表”中备注；

　　2）*方需提供样品。*方代测之后提供客观真实的电子版代测数据结果，如有跟*方预期结果不一致之处，*方不承担相关责任。

　　3）若实验进展得不顺利，*方应及时和*方沟通，由双方协商实验进行一些调整（延时或者更改实验方案）；

　　4）实验完成后，*方将实验结果、原始数据等材料通过电子邮件形式发送*方，实验过程中出现的问题**双方友好协商。

　　2.6 细胞分析

　　1）*方根据*方提供样品及样本信息表中*方填写的内容进行TUNEL细胞凋亡检测；

　　2）*方对*方所做项目的内容承担保密义务，未经*方书面许可，不得泄露或者私自将数据结果转让他人，应国家主管机关或有权机构要求除外；

　　3）*方会慎重对待*方提供的样品，但对于实验过程中的样品损耗（包括实验失败造成的样品损耗），*方不承担赔偿责任。