(略) （以下简称“采购人”）按照《中华人民共和国政府采购法》和《 (略) 采购方式管理办法》等法律、法规的有关规定，于 * 日（周 * ） * ： * 在 (略) (略) (略) 内竞争性磋商采购会议。兹邀请符合相关资格条件、具有完成本项目能力的供应商（以下简称“投标人”）参加。

1、项目内容及预算:

1.1采购项目名称《yyzc 点击查看>> (略) (略) 内竞争性磋商采购目录》

1.2 项目编号：yyzc 点击查看>> 预算金额 点击查看>> 元。

1.3付款方式： (略) 议中,双方协商确定。

2、供应商资格条件：

2.1投标人须在中国境内注册，能在国内合法提供采购内容及其相应服务的企业，持有效的营业执照、组织机构代码证、税务登记证、法定代表人授权书、法定代表人身份证明书、最近 * 年内任意连续两个月以上依法缴纳 (略) 会保险费缴费凭证、产品用户名单及销售业绩材料、产品介绍彩页、信用记录信息截图（可通过“信用中国www.credi 点击查看>> ”、“中 (略) www.ccg 点击查看>> ”等渠道查询，并将查询结果截图打印加盖鲜章）， (略) 贿记录、 (略) 人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严 (略) 为记录名单的供应商，拒绝参与本项目。

2.2本次采购不接受联合体投标。

2.3 (略) 有品目做完整报价，不允许有漏项。

2.4为了方便采购人统计和比较，请各投标人按附件表格的顺 (略) 报价，不要随意改动附件表格格式。

3、注意事项

3.1凡与本项目有关的通知， (略) 将在 “ (略) 网”发布公告 (略) 有与通知有关的潜在投标人，而不再用其他方式通知， (略) ， (略) ，导致项目废标的由投标人自负，采购人不予承担任何责任。

3.2 本采购项目无需提前报名， (略) 文件，也不必缴纳投标保证金和履约保证金。

3.3 采购会议开始时，投标人须提交针对本次采购会议的密封完好的标书（ * 正两副）。

3.4 (略) 采购项目都采用综合评分法评审（评分办法可电话索取）

4、采购单位基本情况

4.1 联系人及电话：陈老师 点击查看>> ；

4.2 采购人地址： (略) 省 (略) 市 (略) 区聂路 * 号。

(略)

* 日

附件1： 《yyzc 点击查看>> (略) (略) 内竞争性磋商采购目录》

* 包详细要求：

该标包，投标人需承诺完成以下工作，含检测费和试剂费及其它相关费用。

1.基因过表达及干扰病毒包装

2. 过表达及干扰后CCK8检测细胞增殖

细胞分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

3. 过表达及干扰后相关基因表达变化检测

细胞分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

检测 * 个基因表达变化：

4.免疫共沉淀检测蛋白间相互作用

分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

免疫共沉淀检测

5. 荧光素酶报告实验检测RNA调控关系检测

分组：

（1）miRNA过表达对照+靶基因结合位点野生型报告质粒

（2）miRNA过表达+靶基因结合位点野生型报告质粒

（3）miRNA过表达对照+靶基因结合位点突变型报告质粒

（4）miRNA过表达+靶基因结合位点突变型报告质粒

6.过表达及干扰后细胞功能检测

分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

建议按以下格式计算报价（仅供参考，如果投标人认为还有其它的费用或耗材，可在下表中增加，但总费用不得超过预算。）

* 包详细要求：

* 、大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养及鉴定

(略) SD正常大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养及鉴定。

大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养： * 小时内的新生 SD大鼠苯巴比妥（ * mg /kg）腹腔注射麻醉后, 用大头针将 * 肢固定俯卧于泡沫手术台上, 用 * %酒精消毒皮肤, 铺无菌手术巾。 (略) 正中切开皮肤, 钝性分离脊柱两旁肌肉, 充分暴露棘突和横突， (略) 椎管开口插入显微剪，交替在中线两 (略) 剪开，用显微镊去除椎板暴露脊髓，解剖显微镜下可见两侧椎间孔内圆形透亮的脊神经节，显微镊轻轻推脊髓两侧以松动神经节，然后慢慢将脊髓从椎管中提出（神经节成串挂于脊髓两侧）转入装有5mLDF/ * 培养基的 * mm培养皿中。在解剖显微镜下用镊子逐个分离摘取神经节，放入盛有4℃ DF- * 培养基的培养皿中，眼科剪将神经节剪至0.5mm³大小的碎块，并用培养液冲洗3遍。将碎块移入加有0. * %胰蛋白酶+EDTA的离心管中， * ℃培养箱中消化 * min。吸出组织加入含有5% FS和5%马血清的DF- * 培养基离心管中作用 * min，终止胰蛋白酶的消化，然后将漂浮的絮状组织吸出，置入另 * 离心管，用含含有5%FS和5%马血清的DF- * 培养基漂洗2次，最后加入含有5%FS和5%马血清的DF- * 培养基，用吸管小心吹打，将其制成单细胞悬液，以 * 个/ml的密度接种于用多 (略) 理的 * 孔塑料细胞培养板中。于 * ℃、5%CO2 (略) 培养。

纯化培养：培养 (略) 分DRG已经贴壁, 全量换液并加入5μmol/L阿糖胞苷以抑制非神经元细胞的增殖， * h后全量换液，此后每 * h半量换液。

鉴定：

（1）倒置相差显微镜观察细胞形态，并白光拍照。

（2）制作细胞片片，免疫荧光检测NSE的分布情况（NSE：神经元特异性烯醇化酶）。

建议按以下格式计算报价（仅供参考）：

大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养：白光拍照3样：XX元/张×3样=XXX元

免疫荧光3样：XX元/样×3样=XXX元

荧光拍照3样：XX元/样×3样=XXX元

* 、ET-1/TRPA1/SP信号通路在背根神经节神经元细胞中作用机制

实验分组：

① 背根神经节神经元细胞

② 背根神经节神经元细胞+ET-1

③ 背根神经节神经元细胞+TRPA1抑制剂

④ 背根神经节神经元细胞+ET-1+TRPA1抑制剂

取对数期期细胞，种于6孔板，进行上述干预。 * h后性下述检测：

（1） 每组2重复，全细胞膜片钳检测细胞膜电位变化；

（2） 每组3重复，免疫荧光检测ET-1、TRPA1、SP的表达情况；

（3） 每组3重复，WB检测ET-1、TRPA1、SP的表达情况。

（4） 建议按以下格式计算报价（仅供参考）：

细胞培养：XXX元

膜片钳检测：XXX元/样×8孔=XXX元

免疫荧光：XX元/样× * 样=XXX元

荧光拍照：XX元/样× * 样=XXX元

WB：检测3个抗体，按M-1-2-3-4-1-2-3-4-1-2-3-4，每个抗体1张膜，共需3张膜，每张膜XXX元，共XXX元。

需要使用的试剂（下列信息仅供参考，中标人根据实际检测服务需要提供，直到项目完成）

NSE抗体 bs- * R bioss * μl

ET-1抗体 bs- * R bioss * μl

TRPA1抗体 ACC- * Biocompare 若干

SP抗体 ab * 4 abcam * μl

TRPA1抑制剂 HY-N * MCE 5mg

内皮素1重组蛋白 LMAI Bio 若干

(略) （以下简称“采购人”）按照《中华人民共和国政府采购法》和《 (略) 采购方式管理办法》等法律、法规的有关规定，于 * 日（周 * ） * ： * 在 (略) (略) (略) 内竞争性磋商采购会议。兹邀请符合相关资格条件、具有完成本项目能力的供应商（以下简称“投标人”）参加。

1、项目内容及预算:

1.1采购项目名称《yyzc 点击查看>> (略) (略) 内竞争性磋商采购目录》

1.2 项目编号：yyzc 点击查看>> 预算金额 点击查看>> 元。

1.3付款方式： (略) 议中,双方协商确定。

2、供应商资格条件：

2.1投标人须在中国境内注册，能在国内合法提供采购内容及其相应服务的企业，持有效的营业执照、组织机构代码证、税务登记证、法定代表人授权书、法定代表人身份证明书、最近 * 年内任意连续两个月以上依法缴纳 (略) 会保险费缴费凭证、产品用户名单及销售业绩材料、产品介绍彩页、信用记录信息截图（可通过“信用中国www.credi 点击查看>> ”、“中 (略) www.ccg 点击查看>> ”等渠道查询，并将查询结果截图打印加盖鲜章）， (略) 贿记录、 (略) 人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严 (略) 为记录名单的供应商，拒绝参与本项目。

2.2本次采购不接受联合体投标。

2.3 (略) 有品目做完整报价，不允许有漏项。

2.4为了方便采购人统计和比较，请各投标人按附件表格的顺 (略) 报价，不要随意改动附件表格格式。

3、注意事项

3.1凡与本项目有关的通知， (略) 将在 “ (略) 网”发布公告 (略) 有与通知有关的潜在投标人，而不再用其他方式通知， (略) ， (略) ，导致项目废标的由投标人自负，采购人不予承担任何责任。

3.2 本采购项目无需提前报名， (略) 文件，也不必缴纳投标保证金和履约保证金。

3.3 采购会议开始时，投标人须提交针对本次采购会议的密封完好的标书（ * 正两副）。

3.4 (略) 采购项目都采用综合评分法评审（评分办法可电话索取）

4、采购单位基本情况

4.1 联系人及电话：陈老师 点击查看>> ；

4.2 采购人地址： (略) 省 (略) 市 (略) 区聂路 * 号。

(略)

* 日

附件1： 《yyzc 点击查看>> (略) (略) 内竞争性磋商采购目录》

* 包详细要求：

该标包，投标人需承诺完成以下工作，含检测费和试剂费及其它相关费用。

1.基因过表达及干扰病毒包装

2. 过表达及干扰后CCK8检测细胞增殖

细胞分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

3. 过表达及干扰后相关基因表达变化检测

细胞分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

检测 * 个基因表达变化：

4.免疫共沉淀检测蛋白间相互作用

分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

免疫共沉淀检测

5. 荧光素酶报告实验检测RNA调控关系检测

分组：

（1）miRNA过表达对照+靶基因结合位点野生型报告质粒

（2）miRNA过表达+靶基因结合位点野生型报告质粒

（3）miRNA过表达对照+靶基因结合位点突变型报告质粒

（4）miRNA过表达+靶基因结合位点突变型报告质粒

6.过表达及干扰后细胞功能检测

分组：

（1）过表达对照

（2）过表达

（3）干扰对照

（4）干扰对照

建议按以下格式计算报价（仅供参考，如果投标人认为还有其它的费用或耗材，可在下表中增加，但总费用不得超过预算。）

* 包详细要求：

* 、大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养及鉴定

(略) SD正常大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养及鉴定。

大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养： * 小时内的新生 SD大鼠苯巴比妥（ * mg /kg）腹腔注射麻醉后, 用大头针将 * 肢固定俯卧于泡沫手术台上, 用 * %酒精消毒皮肤, 铺无菌手术巾。 (略) 正中切开皮肤, 钝性分离脊柱两旁肌肉, 充分暴露棘突和横突， (略) 椎管开口插入显微剪，交替在中线两 (略) 剪开，用显微镊去除椎板暴露脊髓，解剖显微镜下可见两侧椎间孔内圆形透亮的脊神经节，显微镊轻轻推脊髓两侧以松动神经节，然后慢慢将脊髓从椎管中提出（神经节成串挂于脊髓两侧）转入装有5mLDF/ * 培养基的 * mm培养皿中。在解剖显微镜下用镊子逐个分离摘取神经节，放入盛有4℃ DF- * 培养基的培养皿中，眼科剪将神经节剪至0.5mm³大小的碎块，并用培养液冲洗3遍。将碎块移入加有0. * %胰蛋白酶+EDTA的离心管中， * ℃培养箱中消化 * min。吸出组织加入含有5% FS和5%马血清的DF- * 培养基离心管中作用 * min，终止胰蛋白酶的消化，然后将漂浮的絮状组织吸出，置入另 * 离心管，用含含有5%FS和5%马血清的DF- * 培养基漂洗2次，最后加入含有5%FS和5%马血清的DF- * 培养基，用吸管小心吹打，将其制成单细胞悬液，以 * 个/ml的密度接种于用多 (略) 理的 * 孔塑料细胞培养板中。于 * ℃、5%CO2 (略) 培养。

纯化培养：培养 (略) 分DRG已经贴壁, 全量换液并加入5μmol/L阿糖胞苷以抑制非神经元细胞的增殖， * h后全量换液，此后每 * h半量换液。

鉴定：

（1）倒置相差显微镜观察细胞形态，并白光拍照。

（2）制作细胞片片，免疫荧光检测NSE的分布情况（NSE：神经元特异性烯醇化酶）。

建议按以下格式计算报价（仅供参考）：

大鼠背根神经节神经元细胞原代分离培养：白光拍照3样：XX元/张×3样=XXX元

免疫荧光3样：XX元/样×3样=XXX元

荧光拍照3样：XX元/样×3样=XXX元

* 、ET-1/TRPA1/SP信号通路在背根神经节神经元细胞中作用机制

实验分组：

① 背根神经节神经元细胞

② 背根神经节神经元细胞+ET-1

③ 背根神经节神经元细胞+TRPA1抑制剂

④ 背根神经节神经元细胞+ET-1+TRPA1抑制剂

取对数期期细胞，种于6孔板，进行上述干预。 * h后性下述检测：

（1） 每组2重复，全细胞膜片钳检测细胞膜电位变化；

（2） 每组3重复，免疫荧光检测ET-1、TRPA1、SP的表达情况；

（3） 每组3重复，WB检测ET-1、TRPA1、SP的表达情况。

（4） 建议按以下格式计算报价（仅供参考）：

细胞培养：XXX元

膜片钳检测：XXX元/样×8孔=XXX元

免疫荧光：XX元/样× * 样=XXX元

荧光拍照：XX元/样× * 样=XXX元

WB：检测3个抗体，按M-1-2-3-4-1-2-3-4-1-2-3-4，每个抗体1张膜，共需3张膜，每张膜XXX元，共XXX元。

需要使用的试剂（下列信息仅供参考，中标人根据实际检测服务需要提供，直到项目完成）

NSE抗体 bs- * R bioss * μl

ET-1抗体 bs- * R bioss * μl

TRPA1抗体 ACC- * Biocompare 若干

SP抗体 ab * 4 abcam * μl

TRPA1抑制剂 HY-N * MCE 5mg

内皮素1重组蛋白 LMAI Bio 若干