13

口蹄疫O型抗体检测试剂盒（改进型液相阻断）

1.用途：用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫O型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。

2.原理：阻断ELISA。

3.产品规格及主要配置：

（1）规格：≥5块ELISA板/盒；

（2）兔抗包被ELISA板；

（3）PBST液为25倍浓缩液，其余试剂为即用试剂，不需稀释。

4.操作过程及要求：

（1）抗原抗体（阴阳性对照血清及待检血清）反应：可根据不同的需要，选择其中的一种布局在抗原抗体反应板上操作（抗体效价测定（定量）检测10份样品或20份样品布局）。

（1.1）稀释血清：以抗体效价测定（定量）检测10份样品为例操作，在酶标板上，以50μl/孔的量用1×PBST 2倍连续稀释血清，被检血清在第1～10列从1:4（即A1～A10孔，75μl PBST加25μl被检血清）稀释至1:512；在第11列稀释阳性对照血清，从1:2（即A11孔50μl PBST加50μl阳性对照血清）稀释至1:256；A12～B12孔稀释阴性对照血清，从1:2稀释至1:4；E12～H12孔为病毒抗原对照孔。

（1.2）加病毒抗原：将病毒抗原用抗原稀释液稀释至工作浓度，以50μl/孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，4孔病毒抗原对照孔仅加入100μl/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，被检血清从1:8～1:1024，由于阳性对照血清已经预先作了8倍稀释，则变为1:32～1:4096。封板，振荡，37℃温育30分钟。

（2）用PBST连续洗板3～5次，拍干，按50μl/孔加口蹄疫O型酶标抗体工作液（蓝色），封板，37℃温育30分钟。

（3）用PBST洗板3～5次，拍干。将TMB底物A溶液和B溶液以1:1比例混匀，加入混匀后的底物溶液50μL/孔，置37℃显色15分钟。

（4）显色反应结束后，加终止液50μL/孔，终止反应，在酶标仪上读取D450nm值。

5.结果评价：

（1）试验认可标准：

每块板设4孔病毒抗原对照，病毒抗原对照D450nm值应在1.0以上。阳性对照抗体效价应在1:1024±1滴度以内，阴性对照血清抗体效价应<1:8。

（2）血清抗体效价的判定

病毒抗原对照4孔，弃去最高和最低D450nm值，计算剩余2孔的平均D450nm值，再除以2，即50%对照值，该值即为临界值，表示阻断50％反应的对照D450nm值。被检血清D450nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于等于临界值的孔为阳性孔。若临界值与稀释倍数最高阳性孔的D450nm值相同，则以被检血清阳性孔的最高稀释倍数作为该份血清的抗体效价；若临界值处于两个稀释孔D450nm值之间，抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值，如处于1:64（反对数值为1.8）与1:128（反对数值为2.1）之间，则判定该份血清的抗体效价为1:90（反对数值为1.95）。

（3）结果判定：

抗体效价大于或等于1:128判为口蹄疫O型抗体阳性；1:64～1:128时，判为可疑；小于1:64，判定为阴性。可疑血清样品，可以重测，重测抗体效价大于或等于1:128，判为阳性，小于1:128判为阴性。

6.保存条件：

口蹄疫O型病毒抗原：-20℃以下保存（-40℃以下更稳定）；其余试剂盒组分放置4℃保存。

7.试剂盒有效期≥12个月，到用户手上有效期≥10个月。

14

口蹄疫A型抗体检测试剂盒（改进型液相阻断）

1.用途：用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫A型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。。

2.原理：阻断ELISA。

3.产品规格及主要配置：

（1）规格：≥5块ELISA板/盒；

（2）兔抗包被ELISA板；

（3）PBST液为25倍浓缩液，其余试剂为即用试剂，不需稀释。

4.操作过程及要求：

（1）抗原抗体（阴阳性对照血清及待检血清）反应：可根据不同的需要，选择其中的一种布局在抗原抗体反应板上操作（抗体效价测定（定量）检测10份样品或20份样品布局）。

（1.1）稀释血清：以抗体效价测定（定量）检测10份样品为例操作，在酶标板上，以50μl/孔的量用1×PBST 2倍连续稀释血清，被检血清在第1～10列从1:4（即A1～A10孔，75μl PBST加25μl被检血清）稀释至1:512；在第11列稀释阳性对照血清，从1:2（即A11孔50μl PBST加50μl阳性对照血清）稀释至1:256；A12～B12孔稀释阴性对照血清，从1:2稀释至1:4；E12～H12孔为病毒抗原对照孔。

（1.2）加病毒抗原：将病毒抗原用抗原稀释液稀释至工作浓度，以50μl/孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，4孔病毒抗原对照孔仅加入100μl/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，被检血清从1:8～1:1024，由于阳性对照血清已经预先作了8倍稀释，则变为1:32～1:4096。封板，振荡，37℃温育30分钟。

（2）用PBST连续洗板3～5次，拍干，按50μl/孔加口蹄疫A型酶标抗体工作液（蓝色），封板，37℃温育30分钟。

（3）用PBST洗板3～5次，拍干。将TMB底物A溶液和B溶液以1:1比例混匀，加入混匀后的底物溶液50μL/孔，置37℃显色15分钟。

（4）显色反应结束后，加终止液50μL/孔，终止反应，在酶标仪上读取D450nm值。

5.结果评价：

（1）试验认可标准：

每块板设4孔病毒抗原对照，病毒抗原对照D450nm值应在1.0以上。阳性对照抗体效价应在1:1024±1滴度以内，阴性对照血清抗体效价应<1:8。

（2）血清抗体效价的判定

病毒抗原对照4孔，弃去最高和最低D450nm值，计算剩余2孔的平均D450nm值，再除以2，即50%对照值，该值即为临界值，表示阻断50％反应的对照D450nm值。被检血清D450nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于等于临界值的孔为阳性孔。若临界值与稀释倍数最高阳性孔的D450nm值相同，则以被检血清阳性孔的最高稀释倍数作为该份血清的抗体效价；若临界值处于两个稀释孔D450nm值之间，抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值，如处于1:64（反对数值为1.8）与1:128（反对数值为2.1）之间，则判定该份血清的抗体效价为1:90（反对数值为1.95）。

（3）结果判定：

抗体效价大于或等于1:128判为口蹄疫A型抗体阳性；1:64～1:128时，判为可疑；小于1:64，判定为阴性。可疑血清样品，可以重测，重测抗体效价大于或等于1:128，判为阳性，小于1:128判为阴性。

6.保存条件：

口蹄疫A型病毒抗原：-20℃以下保存（-40℃以下更稳定）；其余试剂盒组分放置4℃保存。

7.试剂盒有效期≥12个月，到用户手上有效期≥10个月。

13

口蹄疫O型抗体检测试剂盒（改进型液相阻断）

1.用途：用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫O型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。

2.原理：阻断ELISA。

3.产品规格及主要配置：

（1）规格：≥5块ELISA板/盒；

（2）兔抗包被ELISA板；

（3）PBST液为25倍浓缩液，其余试剂为即用试剂，不需稀释。

4.操作过程及要求：

（1）抗原抗体（阴阳性对照血清及待检血清）反应：可根据不同的需要，选择其中的一种布局在抗原抗体反应板上操作（抗体效价测定（定量）检测10份样品或20份样品布局）。

（1.1）稀释血清：以抗体效价测定（定量）检测10份样品为例操作，在酶标板上，以50μl/孔的量用1×PBST 2倍连续稀释血清，被检血清在第1～10列从1:4（即A1～A10孔，75μl PBST加25μl被检血清）稀释至1:512；在第11列稀释阳性对照血清，从1:2（即A11孔50μl PBST加50μl阳性对照血清）稀释至1:256；A12～B12孔稀释阴性对照血清，从1:2稀释至1:4；E12～H12孔为病毒抗原对照孔。

（1.2）加病毒抗原：将病毒抗原用抗原稀释液稀释至工作浓度，以50μl/孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，4孔病毒抗原对照孔仅加入100μl/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，被检血清从1:8～1:1024，由于阳性对照血清已经预先作了8倍稀释，则变为1:32～1:4096。封板，振荡，37℃温育30分钟。

（2）用PBST连续洗板3～5次，拍干，按50μl/孔加口蹄疫O型酶标抗体工作液（蓝色），封板，37℃温育30分钟。

（3）用PBST洗板3～5次，拍干。将TMB底物A溶液和B溶液以1:1比例混匀，加入混匀后的底物溶液50μL/孔，置37℃显色15分钟。

（4）显色反应结束后，加终止液50μL/孔，终止反应，在酶标仪上读取D450nm值。

5.结果评价：

（1）试验认可标准：

每块板设4孔病毒抗原对照，病毒抗原对照D450nm值应在1.0以上。阳性对照抗体效价应在1:1024±1滴度以内，阴性对照血清抗体效价应<1:8。

（2）血清抗体效价的判定

病毒抗原对照4孔，弃去最高和最低D450nm值，计算剩余2孔的平均D450nm值，再除以2，即50%对照值，该值即为临界值，表示阻断50％反应的对照D450nm值。被检血清D450nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于等于临界值的孔为阳性孔。若临界值与稀释倍数最高阳性孔的D450nm值相同，则以被检血清阳性孔的最高稀释倍数作为该份血清的抗体效价；若临界值处于两个稀释孔D450nm值之间，抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值，如处于1:64（反对数值为1.8）与1:128（反对数值为2.1）之间，则判定该份血清的抗体效价为1:90（反对数值为1.95）。

（3）结果判定：

抗体效价大于或等于1:128判为口蹄疫O型抗体阳性；1:64～1:128时，判为可疑；小于1:64，判定为阴性。可疑血清样品，可以重测，重测抗体效价大于或等于1:128，判为阳性，小于1:128判为阴性。

6.保存条件：

口蹄疫O型病毒抗原：-20℃以下保存（-40℃以下更稳定）；其余试剂盒组分放置4℃保存。

7.试剂盒有效期≥12个月，到用户手上有效期≥10个月。

14

口蹄疫A型抗体检测试剂盒（改进型液相阻断）

1.用途：用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫A型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。。

2.原理：阻断ELISA。

3.产品规格及主要配置：

（1）规格：≥5块ELISA板/盒；

（2）兔抗包被ELISA板；

（3）PBST液为25倍浓缩液，其余试剂为即用试剂，不需稀释。

4.操作过程及要求：

（1）抗原抗体（阴阳性对照血清及待检血清）反应：可根据不同的需要，选择其中的一种布局在抗原抗体反应板上操作（抗体效价测定（定量）检测10份样品或20份样品布局）。

（1.1）稀释血清：以抗体效价测定（定量）检测10份样品为例操作，在酶标板上，以50μl/孔的量用1×PBST 2倍连续稀释血清，被检血清在第1～10列从1:4（即A1～A10孔，75μl PBST加25μl被检血清）稀释至1:512；在第11列稀释阳性对照血清，从1:2（即A11孔50μl PBST加50μl阳性对照血清）稀释至1:256；A12～B12孔稀释阴性对照血清，从1:2稀释至1:4；E12～H12孔为病毒抗原对照孔。

（1.2）加病毒抗原：将病毒抗原用抗原稀释液稀释至工作浓度，以50μl/孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，4孔病毒抗原对照孔仅加入100μl/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，被检血清从1:8～1:1024，由于阳性对照血清已经预先作了8倍稀释，则变为1:32～1:4096。封板，振荡，37℃温育30分钟。

（2）用PBST连续洗板3～5次，拍干，按50μl/孔加口蹄疫A型酶标抗体工作液（蓝色），封板，37℃温育30分钟。

（3）用PBST洗板3～5次，拍干。将TMB底物A溶液和B溶液以1:1比例混匀，加入混匀后的底物溶液50μL/孔，置37℃显色15分钟。

（4）显色反应结束后，加终止液50μL/孔，终止反应，在酶标仪上读取D450nm值。

5.结果评价：

（1）试验认可标准：

每块板设4孔病毒抗原对照，病毒抗原对照D450nm值应在1.0以上。阳性对照抗体效价应在1:1024±1滴度以内，阴性对照血清抗体效价应<1:8。

（2）血清抗体效价的判定

病毒抗原对照4孔，弃去最高和最低D450nm值，计算剩余2孔的平均D450nm值，再除以2，即50%对照值，该值即为临界值，表示阻断50％反应的对照D450nm值。被检血清D450nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于等于临界值的孔为阳性孔。若临界值与稀释倍数最高阳性孔的D450nm值相同，则以被检血清阳性孔的最高稀释倍数作为该份血清的抗体效价；若临界值处于两个稀释孔D450nm值之间，抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值，如处于1:64（反对数值为1.8）与1:128（反对数值为2.1）之间，则判定该份血清的抗体效价为1:90（反对数值为1.95）。

（3）结果判定：

抗体效价大于或等于1:128判为口蹄疫A型抗体阳性；1:64～1:128时，判为可疑；小于1:64，判定为阴性。可疑血清样品，可以重测，重测抗体效价大于或等于1:128，判为阳性，小于1:128判为阴性。

6.保存条件：

口蹄疫A型病毒抗原：-20℃以下保存（-40℃以下更稳定）；其余试剂盒组分放置4℃保存。

7.试剂盒有效期≥12个月，到用户手上有效期≥10个月。