福建省政府采购货物和服务项目公开招标文件招标编号：ZFCG-2014-26 批 复 号：2014闽财购计0177号 项目名称：福建省动物疫病预防控制中心试剂采购采 购人： 福建省动物疫病预防控制中心招标代理机构： 福建省智信招标有限公司二0一四年四月目录第一章投标邀请3招标货物一览表4第二章投标人须知8一、说明11二、招标文件12三、投标文件的编写12四、投标文件的提交15五、投标文件的评估和比较16六、定标与签订合同19第三章招标内容及要求21第四章试剂盒购销合同（范本）163第五章投标文件格式168注：本招标文件共192页（含封面），请投标人领取招标文件时自行核对，如发现缺、损等情况，自领取招标文件之日起二日内向福建省智信招标有限公司提出，否则，由此造成的一切后果由投标人自负。第一章投标邀请本公司受福建省动物疫病预防控制中心委托，对福建省动物疫病预防控制中心试剂采购的下述货物、服务进行国内公开招标，现欢迎国内合格的投标人前来提交密封的投标文件。1、招标编号：ZFCG-2014-262、招标货物名称：详见《招标货物一览表》附后3、招标文件购买时间：[2014年4月10日至2014年4月26日] (节假日除外)北京时间每天上午8：30至12：00， 下午3：00至5：30。招标文件购买地址：福州市东街92号中福广场27层福建省智信招标有限公司财务部。4、招标文件售价：招标文件售价200元人民币（含纸质版电子版），如需邮寄另加50元人民币特快专递费，售后不退。5、投标截止时间：投标文件应于[2014年4月30日] [ 上午9：00]（北京时间）之前提交到福州市东街92号中福广场27层福建省智信招标有限公司开标大厅，逾期送达的或不符合规定的投标文件将被拒绝。6、开标时间：[2014年4月30日] [ 上午9：00]（北京时间）；开标地点：福州市东街92号中福广场27层福建省智信招标有限公司开标大厅。因中福广场电梯比较拥挤，请投标人尽量提前前往。7、投标人对本次招标活动事项提出疑问的，请在投标截止时间5日之前以书面形式（有效签署的原件并加盖公章，不含电子邮件和传真件）提交到福建省智信招标有限公司，逾期提交的不予受理。8、有关本项目招标的相关信息（包括招标文件若有修改补充），福建省智信招标有限公司将通过中国政府采购网（http://www.ccgp.gov.cn/）、福建省政府采购网（http://cz.fjzfcg.gov.cn/）等有关网站通知，请潜在投标人随时关注相关网站，以免错漏重要信息。 9、参加本项目投标的供应商须办理报名手续：直接至我司办理的，须填写购买招标文件登记表；异地购买招标文件者须按公告提供的开户名、开户行、账号及本公告第3、4条的要求，电汇或转账相应的金额到本公司账户，同时将电汇或转账底单复印件及贵公司所参加的投标项目名称、招标文件编号、公司名称、联系人、联系电话、手机、传真和公司地址填写清楚并加盖公章送至（或传真）本公司。未办理报名手续的不予以书面变更通知及不受理投标。招标代理机构：福建省智信招标有限公司地址：福州市东街92号中福广场27层邮编： 350001 电话： ****-********-***、****-********-*** 传真：****-********-*** 项目联系人： 廖丽松 投标保证金联系人：黄小姐 电子信箱：zhixin01@126.com 开户名：福建省智信招标有限公司 开户行：中国光大银行福州市杨桥支行 帐号：****************37933注：中标公告发布后每周三、四为退还投标保证金时间（联系人：黄小姐电话：0591－********-***）附：招标货物一览表招标货物一览表合同包品目号试剂类型试剂名称规格数量（盒）预算单价（元）预算总价（元）11-1病原及血清学前处理试剂病毒核酸提取试剂100次/盒5170085001-2病毒核酸提取试剂100次/盒27900243001-3病毒核酸提取试剂64次/盒子8014401152001-4牛群疫病调查BLV抗体Elisa10*96/盒48500340001-5BTV抗体Elisa4*96/盒46800272001-6IBRV抗体Elisa4*96/盒45600224001-7BVDV抗体Elisa4*96/盒46500260001-8ATB抗体Elisa4*96/盒48100324001-9AKA抗体Elisa4*96/盒410800432001-10SBV抗体Elisa10*96/盒416800672001-11猪/牛群疫病抗体CSFV抗体Elisa1*96/盒501000500001-12PRV ge抗体Elisa1*96/盒1075075001-13PRV gb抗体Elisa1*96/盒1075075001-14BB抗体I-Elisa1*96/盒101200120001-15BB抗体C-Elisa2*96/盒2210042001-16猪胸膜肺炎抗体APP ELISA（1-12，2，1-9-11，4-7，3-6-8，2-6，2-6-12，5，8，10，12） 2*96/盒 1800080001-17流感A型抗原捕获流感A型抗原ELISA 2*96/盒 1510051001-18梅迪维斯纳/山羊关节炎抗体(MVV/CAEV)确认I-ELISA 2*96/盒 1420042001-19流感N1抗体AIV N1 ELISA 2*96/盒 1670067001-20流感N2抗体AIV N2 ELISA 2*96/盒 1670067001-21支原体肺炎抗体支原体肺炎ELISA 2*96/盒 1340034001-22犬瘟热抗体犬瘟热Elisa1*96/盒 1300030001-23犬细小病毒抗体犬细小病毒Elisa1*96/盒 1300030001-24犬利什曼抗体犬利什曼Elisa 2*96/盒 1590059001-25马传染性贫血抗体马传贫Elisa1*96/盒 1360036001-26马动脉炎抗体马动脉炎Elisa 4*96/盒 1880088001-27马鼻肺炎抗体马鼻肺炎Elisa 2*96/盒 1480048001-28马流感抗体马流感Elisa 2*96/盒 1480048001-29马链球菌病抗体马链球菌病ELISA 2*96/盒 1700070001-30马焦虫抗体马焦虫Elisa 2*96/盒 1480048001-31禽群其他疫病检测禽群普通PCR50份/盒52700135001-32猪群免疫抑制性疾病畜群普通PCR50份/盒52700135001-33禽流感H10型抗原禽群普通PCR50份/盒2270054001-34禽流感H6型抗原禽群普通PCR50份/盒22700540022-1口蹄疫NSP抗体口蹄疫抗体Elisa96次/盒1096096002-2犬细小病毒PCR犬细小病毒PCR50次/盒1375037502-3犬细小病毒PCR犬细小病毒PCR10次/盒17507502-4犬瘟热PCR犬瘟热PCR50次/盒1375037502-5犬瘟热PCR犬瘟热PCR10次/盒17507502-6猪瘟普通PCRPCR50次/盒1375037502-7猪瘟普通PCRPCR10次/盒17507502-8口蹄疫普通PCRPCR50次/盒1375037502-9口蹄疫普通PCRPCR10次/盒17507502-10蓝耳变异株普通PCRPCR50次/盒1375037502-11蓝耳变异株普通PCRPCR10次/盒17507502-12伪狂犬PCRPCR50次/盒1210021002-13伪狂犬PCRPCR10次/盒14204202-14细小病毒PCRPCR10次/盒14204202-15细小病毒PCRPCR50次/盒1210021002-16圆环PCRPCR50次/盒1210021002-17圆环PCRPCR10次/盒14204202-18蓝耳普通PCRPCR50次/盒1375037502-19蓝耳普通PCRPCR10次/盒17507502-20禽流感H5普通PCRPCR50次/盒1375037502-21禽流感H5普通PCRPCR10次/盒17507502-22禽流感H7普通PCRPCR50次/盒10837504050002-23禽流感H7普通PCRPCR10次/盒1507501125002-24禽流感H9普通PCRPCR50次/盒1375037502-25禽流感H9普通PCRPCR10次/盒17507502-26新城疫普通PCRPCR50次/盒1375037502-27新城疫普通PCRPCR10次/盒17607602-28禽流感H5/7/9荧光PCR荧光PCR50次/盒204000800002-29狂犬病抗体ELISA狂犬病抗体Elilsa192次/盒2200040002-30布病试管凝集诊断试剂中监所1套（含阴阳性血清）30400120002-31布病试管凝集诊断试剂阴性血清中监所阴性血清37207402-32布病试管凝集诊断试剂阳性血清中监所阴性血清37207402-33布病病原学诊断盒PCR10次/盒1042042002-34禽流感抗体H5抗原（Re-5）2mL/瓶1024024002-35禽流感抗体H5( )血清(Re-5)2mL/瓶1024024002-36禽流感抗体H5抗原（Re-6）2mL/瓶60240144002-37禽流感抗体H5( )血清(Re-6)2mL/瓶60240144002-38禽流感抗体H7抗原2mL/瓶100240240002-39禽流感抗体H7( )血清2mL/瓶2024048002-40禽流感抗体H9抗原2mL/瓶30240720022-41禽流感抗体H9( )血清2mL/瓶3024072002-42新城疫抗体ND抗原2mL/瓶5012060002-43新城疫抗体ND( )血清2mL/瓶50240120002-44口蹄疫抗体AsiaI型LB-Elisa10板/盒52500125002-45口蹄疫抗体A型LB-Elisa10板/盒1250025002-46口蹄疫抗体C型LB-Elisa10板/盒1250025002-47口蹄疫抗体O型LB-Elisa10板/盒52500125002-48口蹄疫抗体O型正向血凝口蹄疫5mL/瓶2820056002-49猪瘟抗体正向血凝猪瘟5mL/瓶1020020002-50口蹄疫VP1抗体口蹄疫抗体Elisa2*96154000600002-51小反刍兽疫PCR50次/盒52500125002-52小反刍兽疫荧光PCR50次/盒52500125002-53小反刍兽疫ELISA480次/盒55000250002-54小反刍兽疫PCR50次/盒53750187502-55小反刍兽疫荧光PCR50次/盒540002000033-1高蓝抗体高蓝抗体Elisa480次/盒109000900003-2禽鼻气管炎禽鼻气管炎480次/盒25300106003-3减蛋综合症减蛋综合症480次/盒25300106003-4败血支原体败血支原体480次/盒2360072003-5滑液支原体滑液支原体480次/盒2340068003-6火鸡支原体火鸡支原体480次/盒2340068003-7败血支原体/滑液支原体败血支原体/滑液支原体480次/盒2470094003-8败血支原体/滑液支原体/减蛋综合症败血支原体/滑液支原体/减蛋综合症480次/盒28000160003-9肠炎沙门氏菌肠炎沙门氏菌480次/盒25500110003-10鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌480次/盒2470094003-11肠炎沙门氏菌/鼠伤寒沙门氏菌肠炎沙门氏菌/鼠伤寒沙门氏菌480次/盒27200144003-12鼻气管炎鸟杆菌鼻气管炎鸟杆菌480次/盒2470094003-13传法抗体IBD-ELISA Ab480次/盒2290058003-14传支抗体IBV-ELISA Ab480次/盒2290058003-15REO抗体关节炎REO-Ab480次/盒2290058003-16ALV抗原禽白血病抗原ELSIA192次/盒52900145003-17禽脑脊髓炎抗体禽脑脊髓炎AE-Ab480次/盒44700188003-18网内增生抗体REV抗体检测480次/盒44700188003-19传喉抗体传喉ILT-Ab480次/盒45300212003-20鸡传贫抗体鸡传贫子CAV-Ab480次/盒450002000044-1普蓝抗体普蓝抗体Elisa480次/盒12130001560004-2禽白血病抗体ALV抗体检测480次/盒76000420004-3禽白血病-J抗体ALV-J抗体检测480次/盒66000360004-4禽白血病抗原禽白血病抗原ELSIA480次/盒73000210004-5网状内皮组织增生症抗体REV抗体检测480次/盒66000360004-6病毒性关节炎抗体REO抗体检测480次/盒63500210004-7鸡传染性贫血因子抗体CAV抗体检测480次/盒6600036000注:1、投标人按合同包投标，对同一合同包内所有品目号内容投标时必须完整，评标与授标以合同包为单位。2、投标人报价须严格按《招标货物一览表》中的合同包品目号进行报价，投标人应在投标文件中列明各种货物的具体产地、生产厂家、品牌、规格型号、技术参数、数量、单价和总价等，以便评标委员会对投标人进行评议。3、投标人应以包括货物所涉及的有关项目的所有费用进行报价，包括：生产成本、包装成本、运输（至项目县域内指定地点）、保险、质量检验、售后服务、技术资料、关税（若有）、外贸代理费以及所必须的全部费用含保险扩税费。4、投标人所投货物必须是原厂原包装，通过合法渠道获得。5、中标人不得转包他人，若发现转包，采购人有权终止合同，并追究相应法律责任。6、根据财政部《政府采购进口产品管理办法》（财库[2007]119号）及《关于政府采购进口产品管理有关问题的通知》(财办库［2008］248号)要求，本次采购项目合同包1品目号1-4至1-30、合同包3、合同包4试剂产品均已办理进口审批手续，允许进口产品参与投标，同时满足要求的国产产品也可参与投标，余下合同包品目号未办理进口审批手续，不接受进口产品投标，只允许国产产品参与投标［进口产品是指通过中国海关报关验放进入中国境内且产自关境外的产品，但在海关特殊监管区域内生产或加工(包括从境外进口料件)销往境内其他地区的产品除外］。7、本次采购为年度采购，各合同包试剂数量只作参考；具体各合同包采购数量以中标人签订合同后采购人通知为准。8、投标人必须由法定代表人或法定代表人正式授权的投标人代表参加开标会，随时接受评委询问，并予以解答。第二章投标人须知投标人须知前附表本须知前附表的项号内容与招标文件内容如有矛盾，应以本须知前附表为准。项号条款号编 列 内容11.1项目名称：福建省动物疫病预防控制中心试剂采购采购人名称：福建省动物疫病预防控制中心项目内容：详见《招标货物一览表》项目编号：ZFCG-2014-2623.1资格标准：（1）凡具有法人资格，有能力提供招标货物及服务的境内生产企业或经销商；（2）投标人应具备《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定的条件；（3）本项目不接受联合体投标；（4）其他要求详见本章合格的投标人。注：所有资格证明文件复印件须注明“与原件一致”并加盖投标人公章，否则按无效标处理。311.1投标有效期：投标截止期结束后 60 日历日。有效期不足将导致其投标文件被拒绝。4投标文件递交地址：福建省智信招标有限公司（福州市东街92号中福广场27层）接收人： 廖丽松投标截止时间：[2014年4月30日] [ 上午9：00] (北京时间)512投标保证金：合同包1人民币陆仟元整（￥6000.00），合同包2人民币玖仟伍佰元整（￥9500.00），合同包3人民币叁仟元整（￥3000.00），合同包4人民币叁仟肆佰元整（￥3400.00），投标保证金以转账或电汇形式提交，不直接接受现金、现金存款或汇票，以投标截止时间前一天到达本公司账户为准。投标保证金未按规定时间到达指定账户的投标文件将被拒绝。6具体评标标准和方法：本次采购项目各合同包采用最低价评标法各确定三名中标候选人。分两阶段评标，第一阶段评技术商务标，第二阶段评报价标。首先由评标委员会根据招标文件要求审核各投标人投标文件是否合格、有效，专业条件、技术要求是否实质性响应招标文件要求。经第一阶段评选出实质性响应招标文件技术、商务要求的投标人进入第二阶段评标。评标委员会按照招标文件规定的评标标准和方法评出实质性响应招标文件报价要求的投标人，并在各项优惠政策价格扣除（见后）基础上计算出各投标人价格部分经折扣后的报价。以第二阶段评标中按照经优惠政策折扣后的投标报价由低到高排序，评标委员会推荐报价最低者为第一中标候选人，报价次低者为第二中标候选人，报价第三者为第三中标候选人，若出现投标人最低报价相同的情况时，评委会将以投标企业实力（注册资金）高低进行排序，若出现投标企业实力（注册资金）相同的情况时，评委会将以投标企业售后服务的优劣进行排序。价格扣除部分：关于政府采购促进中小企业发展暂行办法价格扣除标准根据财政部，工信部印发的《政府采购促进中小企业发展暂行办法》（财库【2011】181号）。凡参加此次报价的小型和微型企业提供本企业制造的或者提供其他小型、微型企业制造的产品，其报价部分给予6%的价格扣除优惠，但必须同时提供如下证明材料，否则不予价格扣除。（1）中小企业声明函（2）由企业所在地的县级以上中小企业主管部门出具的属于小型、微型企业制造的产品证明文件。中小企业划分标准详见工业和信息化部、国家统计局、国家发展和改革委员会、财政部出台的工信部联企业[2011]300号文件。713.2投标文件应由投标人的法定代表人或者其授权代表签名并加盖公章，如由后者签名，应提供“法定代表人授权书”。8交货期：本次招标全部货物将按照采购人要求分批发货，以邮件订单为准。9交货地点：福建省动物疫病预防控制中心指定地点。10付款方式：单批货物交货并经双方验收合格2个月后或货物全部使用完毕后，采购人凭收讫货物的验收凭证和货物验收合格文件等材料以转账方式向中标人一次性支付该批货物100%的货物价款。11最高限价：预算价作为最高限价，各合同包最高限价分别为：合同包1人民币599200.00元，合同包2人民币958000.00元，合同包3人民币312300.00元，合同包4人民币348000.00元，各品目号预算单价和预算总价具体详见《招标货物一览表》，投标人报价超出预算单价和预算总价的，均按无效投标处理。12投标人须保障采购人在使用该货物或其任何一部分时不受到第三方关于侵犯专利权、商标权或工业设计权等知识产权的指控。如果任何第三方提出侵权指控与采购人无关，投标人须与第三方交涉并承担可能发生的责任与一切费用。如采购人因此而遭致损失的，投标人应赔偿该损失。13本次报价的合同采用固定价格方式。除非另有规定，投标人所报单价和以细目总价填报的价格在合同实施期间应保持不变，均不受市场价格及政策性价格的调整而增减。投标人提供的货物必须以现场交货价填报货物价格。14投标人应如实详细填写技术规格和商务偏离表，应将技术参数逐条详细列在偏离表中，不得只简单列出规格型号，也不得在“投标响应”栏中仅出现“响应”字样，若无详细技术规格偏离表和商务偏离表或未按要求填写者，评标委员会将作出不利于投标人的判断。15招标服务费：本次采购项目不向中标人收取招标服务费，由采购人一次性支付代理费人民币1.7万元，请各投标人投标报价时予以充分考虑。1624招标项目行政监督部门：福建省财政厅政府采购办公室、福建省农业厅纪检监察室、福建省农业厅计财处。17无效投标条款无效投标条款详见本招标文件第16页第17.3.2条款要求，请各投标人认真研读。18废标条款废标条款：根据《中华人民共和国政府采购法》第三十六条规定,在招标采购中，出现下列情形之一的，应予废标：(一)符合专业条件的供应商或者对招标文件作实质响应的供应商不足三家的； (二)出现影响采购公正的违法、违规行为的； (三)因重大变故，采购任务取消的。19重大偏差与细微偏差以下为重大偏差与细微偏差的条款，请各投标人认真审阅。（一）重大偏差：1、投标文件未按招标文件要求加盖公章并由法定代表人或其书面授权的代理人签字的；2、投标文件载明的招标项目完成期限超过招标文件规定的；3、明显不符合技术规格、技术标准的要求；4、投标文件载明的货物包装方式、检验标准和方法等不符合招标文件的要求；5、投标文件中附有招标人不能接受的条件；6、不符合招标文件中规定的其他实质性条款；注：投标人的投标文件若有上述情形之一的，认定为未对招标文件作出实质性响应，作无效投标处理。（二）、细微偏差：投标文件在实质上响应招标文件要求，但在个别地方存在漏项或者提供了不完整的技术信息和数据等情况，并且补正这些遗漏或者不完整不会对其他投标人造成不公平的结果。细微偏差不影响投标文件的有效性。评标委员会应当书面要求存在细微偏差的投标人在评标结束前予以补正。补正的程序和方法按照招标文件投标人须知第18条的规定执行。无法补正的，可在评审时对细微偏差作不利于该投标人的认定。评委会判定重大偏差、细微偏差是依据投标文件，而不寻求其他的外部证据。一、说明1. 适用范围1.1本招标文件仅适用于投标邀请中所叙述项目的货物及服务采购。2. 定义2.1 “采购人”系指本次采购项目的福建省动物疫病预防控制中心。2.2 “招标采购单位”系指组织本次招标活动的采购人或招标代理机构。2.3 “招标代理机构”系指本次招标采购项目活动组织方。2.4 “投标人”系指购买了本招标文件，且已经提交或者准备提交本次投标文件的生产企业或经销商。2.5 “货物”系指中标人按招标文件规定向采购人提供的试剂及其它有关技术资料和材料。2.6 “服务”系指招标文件规定中标人须承担的技术服务以及其他类似的义务。3. 合格的投标人3.1详见本章《投标人须知前附表》第2项号资格标准。3.2须提交的相应资格证明文件：1）法人营业执照；2）税务登记证书；3) 法定代表人身份证复印件（正反两面均需提供）；4）投标代表人身份证复印件（正反两面均需提供）；5）法定代表人授权书原件(格式详见第五章“投标文件格式”，投标代表是法定代表人则无需提供)；6）对《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定条件的声明函。注：以上资格证明文件投标人须提供合格的、有效期内的证明复印件加盖投标人公章，并注明与原件一致，原件备查，否则按无效投标处理。3.3一个投标人只能提交一个投标文件。如果投标人之间存在下列互为关联关系的情形之一的，不得同时参加本项目投标：(1) 法定代表人为同一人的两个及两个以上法人；(2) 母公司、直接或间接持股50％及以上的被投资公司；(3) 均为同一家母公司直接或间接持股50％及以上的被投资公司。3.4 投标人不得与本次招标项下设计、编制技术规格和其它文件的公司或提供咨询服务的公司包括其附属机构有任何关联。注：投标人有责任对3.3、3.4条规定的条款中情形做出声明，否则按无效投标处理。3.5投标代理人在同一个项目中只能接受一个投标人的委托参加投标。4. 投标费用4.1 投标人自行承担其参加投标所涉及的一切费用。二、招标文件5.招标文件的组成5.1招标文件用以阐明所需货物及服务招标程序和合同主要条款。招标文件由下述部分组成：⑴ 投标邀请⑵ 投标人须知 ⑶ 招标内容及要求⑷ 试剂盒购销合同（范本）⑸ 投标文件格式（分技术商务标格式和报价标格式）6.招标文件的澄清6.1 投标人对招标文件如有疑点，可要求澄清。要求澄清应按投标邀请中载明的地址以书面形式（包括信函、电报或传真，下同）通知招标代理机构。招标代理机构将视情况在投标截止时间15个日历日（如至原定截止时间不足15个日历日，则需延长开标时间）前将不标明查询来源的书面答复发给所有投标人，并在采购信息发布的媒体上发布更正公告。该澄清内容为招标文件的组成部分。7.招标文件的修改7.1至投标截止日期前15日（如至原定截止时间不足15个日历日，则需延长开标时间），招标代理机构可主动或依投标人要求澄清的问题而修改招标文件，应在原信息发布的媒体上发布更正公告，并以书面形式通知所有投标人，投标人在收到该通知后应立即以电报或传真的形式予以确认。该修改内容为招标文件的组成部分，对投标人具有约束力。7.2 招标采购单位可以视采购具体情况，延长投标截止时间和开标时间，但至少应当在招标文件要求提交投标文件的投标截止时间三个日历日前，将变更时间以书面形式通知所有招标文件收受人，并在财政部门指定的政府采购信息发布媒体上发布变更公告。该修改内容为招标文件的组成部分。在此情况下，招标人和投标人受投标截止期制约的所有权利和义务均应延长至新的截止日期。 三、投标文件的编写8. 要求8.1投标人应仔细阅读招标文件的所有内容，按照招标文件的要求提交投标文件。投标文件应对招标文件的要求做出实质性响应，并保证所提供的全部资料的真实性，否则其投标将被拒绝。8.2 除非有另外的规定，投标人可对招标货物一览表所列的全部合同包或部分合同包进行投标。招标代理机构不接受有任何可选择性的报价，每一种货物只能有一个报价。9. 投标文件语言9.1投标文件应用中文书写。投标文件中所附或所引用的原件不是中文时，必须提供具有翻译资质的机构翻译的中文译本。翻译机构应为中国翻译协会成员单位，翻译的中文译本应由翻译人员签名并加盖翻译机构公章，同时提供翻译人员翻译资格证书。投标人投标时提供的中文译本、翻译机构及翻译人员资格证书可为复印件，并加盖投标人公章。各种计量单位及符号应采用国际上统一使用的公制计量单位和符号。※中文译本未按上述要求提供的，认定为该项资格或技术商务的证明文件/材料无效，即该项资格或技术商务要求不符合。10. 投标文件的组成10.1技术商务标应包括下列部分：(1) 货物说明一览表(2) 供货范围清单(3) 技术规格偏离表(4) 商务偏离表(5) 质量保证与售后服务承诺(6) 投标人资格证明文件(7) 投标货物均必须具有相应的证明文件(8) 投标人提交的其他资料（如彩页等）(9) 投标保证金复印件10.2报价标应包括下列部分：（1）投标书（2）开标一览表(3) 中小企业声明函(4) 由企业所在地的县级以上中小企业主管部门出具的属于小型、微型企业制造的产品证明文件(5) 投标分项报价表(6)退还投标保证金函10.3特别提示：（1）根据《福建省财政厅关于福建省省级政府采购货物和服务项目招标文件编制指引和实施指引的补充通知（三）》的通知，本项目实行两阶段评标。各投标人提交的投标文件应由技术商务标和报价标两部分组成，投标人必须将技术商务标和报价标分别单独装订，分册密封投标，且技术商务标分册中不得出现投标报价信息，否则该投标人的投标文件将被视为无效投标。（2）投标人的投标文件中如投标书、开标一览表、投标分项报价表或详细报价书等凡是体现投标报价的文件资料均属于报价标，其余资料则为技术商务标。投标人在制作和分册装订、密封投标文件的过程中要十分注意，避免自己造成无效标的结果。具体装订要求详见本章“三、投标文件的编写”中“13.1投标文件的编制与装订要求”。11. 投标有效期11.1投标文件从投标人须知前附表第4项所规定的投标截止期之后开始生效，在投标人须知前附表第3项所规定的期限内保持有效。有效期不足将导致其投标文件被拒绝。11.2特殊情况下招标代理机构可于投标有效期满之前书面要求投标人同意延长有效期，投标人应在招标代理机构规定的期限内以书面形式予以答复。投标人可以拒绝上述要求而其投标保证金可按规定予以退还。投标人答复不明确或者逾期未答复的，均视为拒绝上述要求。对于接受该要求的投标人，既不要求也不允许其修改投标文件，但将要求其相应延长投标保证金有效期，有关退还或不予退还投标保证金的规定在投标有效期延长期内继续有效。12. 投标保证金12.1 投标保证金为投标文件的组成部分之一。12.2 投标人应在提交投标文件之前向招标代理机构缴交投标人须知前附表第5项要求的投标保证金。联合体投标的，可以由联合体中的一方或者共同提交投标保证金，以一方名义提交投标保证金的，对联合体各方均具有约束力。12.3 投标保证金用于保护本次招标活动免受投标人的行为而引起的风险。12.4 投标保证金以电汇、转帐形式提交。12.5 未按规定缴交投标保证金的投标，将被视为无效投标。12.6招标代理机构将在中标通知书发出之日起五个工作日内予以原额无息退还中标人以外的投标人的投标保证金。因招标代理机构原因造成逾期退还投标保证金的,招标代理机构应当按商业银行同期一年期贷款基准利率上浮20%后的利率向投标人支付资金占用费。12.7在中标人签订合同后5个工作日内，中标人的投标保证金予以原额无息退还。12.8 投标保证金的有效期为投标有效期满后的30个日历日12.9 发生以下情况之一的，投标保证金将不予退还：⑴ 投标人在投标截止期后，投标有效期内撤回投标；⑵ 中标人未能做到按本须知第22条规定签订合同；⑶ 以他人名义投标或者以其他方式弄虚作假，骗取中标；⑷ 本招标文件中规定的其他没收投标保证金的情形。上述不予退还投标保证金的情况给招标采购单位造成损失的，还要承担赔偿责任。13. 投标文件的格式13.1投标文件的编制与装订要求：投标人须按本招标文件中第五章第一册“技术商务标格式”和第二册“报价标格式”要求规定的内容和顺序分别编制和单独装订投标文件：应编制封面、目录、页码，数量为正本一份，副本五份，电子文本一份（采用WORD或PDF格式，用非易损介质U盘或光盘保存）。正本必须用A4幅面纸张打印。副本可以用正本的完整复印件。正、副本均须胶装装订成册，并加盖骑缝章(或每页盖章)。封面须标明“正本”、“副本”字样。正本与副本如有不一致，则以正本为准。未按以上规定编制装订者其投标将被视为无效投标。（请各投标人特别注意）13.2投标文件应由投标人的法定代表人或者其授权代表在第五章投标文件格式中出现签名和盖章的相应处签名并加盖公章，如由后者签名，应提供“法定代表人授权书”。13.3本次采购设备使用的报价货币为人民币。13.4投标人应提交证明其拟供货物符合招标文件要求的技术响应文件，该文件可以是文字资料、图纸和数据，并须提供货物主要技术性能的详细描述。13.5投标文件的正本和全部副本均应使用不能擦去的墨料或墨水打印、书写或复印，并由法定代表人或其授权代表签署，盖投标人公章。13.6全套投标文件应无涂改和行间插字，除非这些改动是根据招标代理机构的指示进行的，或者是为改正投标人造成的必须修改的错误而进行的。有改动时，修改处应由授权代表签署证明或加盖校正章。 13.7未按本须知规定的格式填写投标文件、投标文件字迹模糊不清的，其投标将被拒绝。13.8投标文件正本中所有资格证明文件复印件须加盖投标人公章，否则视为无效投标。四、投标文件的提交14.投标文件的密封、标记和递交14.1投标人应将投标文件技术商务标和报价标的正本（一份）和全部副本（五份）均须分别单独密封，并在封口处加盖骑缝公章，标明招标编号、投标人名称、投标货物名称及“正本”或“副本”字样。技术商务标和报价标投标文件未密封将导致投标被拒绝。14.2 每一信封密封处应注明“于2014年 月 日之前（指投标邀请中规定的开标日期及时间）不准启封”的字样，并加盖投标人公章。14.3如果投标文件由邮局或专人送交，投标人应将投标文件按照本须知第14.1条至第14.2条的规定进行装订、密封和标记后，按投标人须知前附表注明的地址送至接收人。14.4如果未按上述规定进行密封和标记，招标代理机构将不承担由此造成的对投标文件的误投或提前拆封的责任。14.5投标文件应在投标邀请中规定的截止时间前送达，迟到的投标文件为无效投标文件, 将被拒收。14.6投标人在投标截止时间前，可以对所提交的投标文件进行修改或者撤回，并书面通知招标代理机构。修改的内容和撤回通知应当按本须知要求签署、盖章、密封，并作为投标文件的组成部分。14.7投标人在投标截止期后不得修改、撤回投标文件。投标人在投标截止期后修改投标文件的，其投标被拒绝。14.8投标截止时间结束后参加投标的投标人不足三家的，本次招标程序终止，除采购任务取消情形外，招标采购单位将依法重新组织招标或者采取其他方式采购。五、投标文件的评估和比较15．开标、评标时间15.1 在投标人须知前附表中所规定的时间、地点开标。15.2开标由招标代理机构主持，采购人、投标人和有关方面代表参加。所有投标人代表（必须与投标文件有权签名人一致）应参加开标会，并签到。 15.3 开标时，由采购人监督人员、投标人推荐代表和投标人授权代表检查投标文件的密封情况，对符合密封要求的投标文件按照提交投标文件时间的先后顺序（或者逆顺序）当场逐一拆封，由开标会主持人宣唱并记录各投标人的报价，唱标内容为“开标一览表”内容。招标代理机构对唱标内容作开标记录，由投标人代表签名确认。15.4开标时，各投标人授权代表须进行投标文件密封性检验与签名确认。15.5开标大会唱标结束后，各投标人授权代表须对本公司的唱标报价给予签名确认。15.6投标人对开标过程及开标记录若有异议，须按开标会须知的规定以书面形式当场向开标会主持人提出，否则视为对本次开标过程及开标记录予以认可，投标人不得在开标以后以各种事由向本公司提出任何异议和要求。16．评标委员会16.1招标代理机构根据招标货物和服务的特点依法组建评标委员会。评标委员会由技术、经济、法律方面的专家和采购人代表组成。成员为5人以上单数组成，专家不能少于三分之二。在开标后的适当时间里由评标委员会对投标文件进行审查、质疑、评估和比较，并做出授予合同的建议。17. 投标文件的初审对所有投标人的评估，都采用相同的程序和标准。评议过程将严格按照招标文件的要求和条件进行。有关投标文件的审查、澄清、评估和比较以及推荐中标候选人的一切情况都不得透露给任一投标人或与上述评标工作无关的人员。投标人任何试图影响评委会对投标文件的评估、比较或者推荐候选人的行为，都将导致其投标被拒绝，并被没收投标保证金。17.1评委会将对投标文件进行检查，以确定投标文件是否完整、有无计算上的错误、是否提交了投标保证金、文件是否已正确签署。 17.2 算术错误将按以下方法更正：(1)投标文件中开标一览表(报价表)内容与投标文件中明细表内容不一致的，以开标一览表(报价表)为准。(2)投标文件的大写金额和小写金额不一致的，以大写金额为准；总价金额与按单价汇总金额不一致的，以单价金额计算结果为准；单价金额小数点有明显错位的，应以总价为准，并修改单价；对不同文字文本投标文件的解释发生异议的，以中文文本为准。如果投标人不接受按上述方法对投标文件中的算术错误进行更正，其投标将被拒绝并没收其投标保证金。17.3资格性检查和符合性检查 17.3.1资格性检查。依据法律法规和招标文件的规定，在对投标文件详细评估之前，评标委员会将依据投标人提交的投标文件按投标人须知前附表第2项所述的资格标准对投标人进行资格审查, 以确定其是否具备投标资格。如果投标人不具备投标资格，不满足招标文件所规定的资格标准或提供资格证明文件不全的, 其投标将被拒绝。17.3.2符合性检查。依据招标文件的规定，评标委员会还将从投标文件的有效性、完整性和对招标文件的响应程度进行审查，以确定是否符合对招标文件的实质性要求作出响应。（采购人可根据具体项目的情况对实质性要求作特别的规定。）实质性偏离是指：（1）实质性影响合同的范围、质量和履行；（2）实质性违背招标文件，限制了采购人的权利和中标人合同项下的义务；（3）不公正地影响了其它作出实质性响应的投标人的竞争地位。对没有实质性响应的投标文件将不进行评估，其投标将被拒绝。凡有下列情况之一者，投标文件也将被视为未实质性响应招标文件要求，按无效标处理。（1）投标文件未按照本章规定分为报价标和技术商务标的；或技术商务标出现报价内容的；（2）投标文件未按本章第13、14条规定要求进行装订、密封、标记的；（3）投标文件未按规定由投标人的法定代表人或其授权代表签名的；或未加盖投标人公章的；或签名人未经法定代表人有效授权委托的；或未在资格证明文件上注明“与原件一致”并加盖投标人公章的；（4）投标人未按规定时间及金额提交投标保证金的；（5）投标有效期不满足招标文件要求的；（6）投标内容与招标内容及要求有重大偏离或保留的；（7）投标人提交的是可选择的报价；（8）投标人未按规定对投标进行报价及分项报价；（9）一个投标人不止投一个标；（10）投标文件组成不符合招标文件要求的；（11）投标文件中提供虚假或失实资料的；（12）投标人的报价超过最高限价的；（13）投标人的报价明显低于其他报价，使得其投标报价可能低于其个别成本的，有可能影响商品质量或不能诚信履约的，但不能合理说明原因或不能提供相关证明材料的；（14）投标人存在串通投标行为的；（15）投标人承诺的交货时间、交货地点、付款方式不满足招标文件要求的；（16）技术要求有任一项负偏离的；(17) 未按规定办理报名手续的；（18）未在投标截止时间前送达的投标文件；（19）投标文件没有正本的；（20）未办理进口审批手续，所投产品为进口产品的。（21）未满足招标文件规定资格标准的；（22）投标人与本次招标项目设计、编制技术规格和其它文件的公司或提供咨询服务的公司包括其附属机构有关联的；（23）不符合招标文件中规定的其它实质性条款。评标委员会决定投标的响应性只根据投标文件本身的内容，而不寻求其他的外部证据。但评标委员会可要求候选中标人对其在投标文件中提供的实质性响应的材料的真实性出具相关证明。18.投标文件的澄清 18.1 对投标文件中含义不明确、同类问题表述不一致或者有明显文字和计算错误的内容，评标委员会可以书面形式要求投标人作出必要的澄清、说明或者纠正。投标人的澄清、说明或者纠正应当在评标委员会规定的时间内以书面形式作出，由其法定代表人或者授权代表签名，并不得超出投标文件的范围或者改变投标文件的实质性内容。18.2 对投标描述和证明材料不一致的，评标委员会应当要求投标人进行书面澄清，并以不利于投标人的内容为准进行评审。投标人的澄清、说明应当采用书面形式，并不得超出投标文件的范围或者改变投标文件的实质性内容。投标人按要求进行澄清的，采购人以澄清内容为准进行验收；投标人未按要求进行澄清的，采购人以投标描述、证明材料中有利于采购人的内容进行验收。19. 比较与评价19.1评标委员会将按投标人须知前附表第6项所述评标方法与标准，对资格性检查和符合性检查合格的投标文件进行商务和技术评估，综合比较与评价。19.2对漏（缺）报项的处理：招标文件中要求列入报价的费用（含配置、功能），漏（缺）报的视同已含在投标总价中。但在评标时取有效投标人该项最高报价加入评标价进行评标。对多报项及赠送项的价格评标时不予核减，全部进入评标价评议。19.3 若投标人的报价明显低于其他报价，使得其投标报价可能低于其个别成本的，有可能影响商品质量或不能诚信履约的，投标人应按评标委员会要求作出书面说明并提供相关证明材料，不能合理说明或不能提供相关证明材料的，可作无效投标处理。19.4评标委员会将按比较与评价最优在先原则, 排列评价顺序, 根据在投标人须知前附表中确定的中标候选人数量推荐出中标候选人。19.5 在评标期间，若出现符合本须知规定的所有投标条件的投标人不足三家情形的，本次招标程序终止，除采购任务取消情形外，招标采购单位将依法重新组织招标或者采取其他方式采购。19.6评标委员会在评标过程中发现投标人存在下列情形之一的，可认定其有串通投标行为，并做出其投标无效的决定：①不同投标人的投标文件错、漏之处一致或雷同，且不能合理解释的；②不同的投标人的法定代表人、委托代理人等由同一个单位缴纳社会保险的；③由同一人或分别由几个有利害关系人携带两个以上（含两个）投标人的企业资料参与资格审查、领取招标资料，或代表两个以上（含两个）投标人参加招标答疑会、交纳或退还投标保证金、开标的；④有关法律、法规或规章规定的其他串通投标行为。六、定标与签订合同20.定标准则20.1最低投标价不作为中标的保证。20.2投标人的投标文件符合招标文件要求，按招标文件确定评标标准、方法，经评委评审并推荐中标候选人。21. 中标通知21.1评标结束后，评标结果经采购人确认后，招标代理机构方应在刊登本采购项目招标公告的媒介上对中标结果进行公示，同时招标代理机构向中标供应商发出中标通知书。中标通知书对采购人和中标供应商具有同等法律效力。中标通知书发出后，采购人改变中标结果，或者中标供应商放弃中标，应按相关法律、规章、规范性文件的要求承担相应的法律责任。投标人对中标公告有异议的，应当在知道或应当知道其权益受到损害之日起7个工作日内，以书面形式向采购人或招标代理机构提出质疑。21.2 《中标通知书》发出同时应将落标书面通知没有中标的其它投标人。21.3 《中标通知书》将作为签订合同的依据。《合同》签订后，《中标通知书》成为《合同》的一部分。21.4《中标通知书》发出后5个工作日内，招标代理机构以原缴交方式向未中标的投标供应商退还其投标保证金。21.5在合同签订后5个工作日内，以原缴交方式退还中标供应商的投标保证金。22.签订合同22.1合同签订单位、中标供应商在《中标通知书》发出之日起30日内，根据招标文件确定的事项和中标供应商投标文件，参照本招标文件第四章的《合同》文本签订合同。双方所签订的合同不得对招标文件和中标供应商投标文件作实质性修改。逾期未签订合同，按照有关法律规定承担相应的法律责任；招标代理机构将没收投标保证金，以抵偿对采购人造成的损失。合同签订单位逾期不与中标供应商签订合同的，按政府采购的有关规定处理。22.2招标文件、招标文件的修改文件、中标供应商的投标文件、补充或修改的文件及澄清或承诺文件等，均为双方签订《合同》的组成部分，并与《合同》一并作为本招标文件所列采购项目的互补性法律文件，与《合同》具有同等法律效力。22.3合同签订单位在合同履行中，需追加与合同标的相同的货物或者服务的，在不改变合同其他条款的前提下，可与供应商协商签订补充合同，但所有补充合同的采购金额不得超过原合同采购金额的百分之十。 22.4采购人根据评标委员会推荐的中标候选人依法确定中标人。采购人应当依法确定排名第一的中标候选人为中标人。当排名第一的中标候选人放弃中标、因不可抗力或者自身原因提出不能履行合同时，采购人可以与排位在中标供应商之后第一位的中标候选供应商签订政府采购合同，以此类推。23质疑处理时限23.1政府采购项目投标人在知道或者应当知道其权益受到损害之日起7个工作日内书面向采购人、采购代理机构提出质疑交提供证明材料；采购人、采购代理机构在收到质疑后7个工作日内作出书面答复。24.招标项目行政监督部门24.1由招标项目行政监督部门可视情依法派员对本招标活动的全程进行监督。24.2投标人如对招标活动有异议，可以按照有关规定向投标人须知前附表第16项所述招标项目行政监督部门投诉。第三章招标内容及要求一、项目概述1、本次采购的货物为福建省动物疫病预防控制中心试剂耗材采购。要求投标人所投货物应质量优良，价格较为低廉。中标人应负责试剂的供应、包装、运输、交货、宣传、培训及其他售后服务等工作。投标人提供的货物内包装应密封紧密，成件包装要牢固，材质要有较强的耐腐蚀性。2、投标人务必仔细阅读招标文件中所规定的，其中包括技术规格在内的所有细则。二、产品技术规格及要求合同包1各品目号的技术参数如下：（一）、合同包1品目号1-1：过滤柱型病毒核酸提取试剂盒保存条件室温保存 适用样本200μL血浆，血清，体分泌物或细胞培养物上清液规格100头份/盒试剂原理病毒核酸提取试剂盒能够简单快速地提取病毒的DNA或RNA。先使用裂解液破坏病毒的外膜，在高盐的条件下DNA或RNA会吸附于管柱内的质膜上。洗涤除去杂质后再用洗脱液或水提取DNA或RNA。当检测的RNA病毒的浓度低时，所附带RNA carrier可帮助RNA吸附于质膜上提高RNA片段的回收率。提取出的DNA或RNA可立即用于RT-PCR、PCR、ReaL-time PCR等分子生物实验。不需要苯酚/氯仿提取，也不需要用酒精沉淀。试剂盒构成VB Lysis Buffer；AD Buffer(浓缩液)1；W1 Buffer；Wash Buffer(浓缩液)2；RNase-free Water；VB 柱；2mL 收集管。操作过程使用前，在AD Buffer瓶子里加入60mL 酒精(96％～100％)使用前，在Wash Buffer瓶子里加入100mL 酒精(96％～100％)第一步裂解1．取200μL样本加入一个离心管中(未提供)，如果样本不够200μL，用PBS(未提供)补充到200μL；2．取400μL (VB Lysis Buffer)加入样本管中，混匀，振荡；3．室温放置10min。第二步吸附1．取一根VB柱放入一根2mL收集管中；2．取450μL (AD Buffer)(已加入酒精)加入样本管中，迅速振荡；3．取600μL上述振荡液加入VB柱，13000rpm离心1min；4．将收集管中的液体丢弃，取剩余的振荡液加入VB柱；13000rpm离心min；5．丢弃收集管，将VB柱加入一个新的收集管。第三步洗脱1．取400μL W1 Buffer加入VB柱；13000rpm离心30秒；2．将收集管中的液体丢弃，VB柱放回收集管；3．取600μL (Wash Buffer)(已加入酒精)加入VB柱；13000rpm离心30秒；4．将收集管中的液体丢弃，VB柱放回收集管；13000rpm离心1min。第四步溶解1．将VB柱加入一个新的离心管中(不含RNA酶)；2．取50μL (RNase－free water)加入VB柱中心处；3．放置3min，直到水被吸收；4．8000rpm离心2min，收集纯化好的核酸。有效期到用户手上有效期应≥6个月。（二）、合同包1品目号1-2：过滤柱病毒核酸提取试剂盒适用范围细胞、组织、全血、骨髓、体液、细菌、病毒。规格100次/盒。保存条件室温，保质期2年。样本量全血(10～1000)μL，培养细胞1×107，组织30mg，细菌1×109，体液(尿液、腹水、胸水、脑积液等)根据具体细胞量。步骤4步：裂解，吸附，清洗，洗脱耗时(7～10)min，柱容量200μg (totaL RNA)，洗脱体积(25-50)μL，得率90%。产量(1～5)μg/mL全血，(100～300)μg/1×107细胞，(1～6)μg/mg组织，(50～200)μg/1×109细菌。纯度 OD260/OD280: 1.9～2.1。用途普通RT-PCR，定量RT-PCR， NASBA，表达芯片分析，cDNA合成，构建cDNA文库，RPA，Northern BLot，mRNA筛选等。操作流程样本预处理a．抗凝全血：离心管中先加入3mL淋巴细胞分离液，在上层小心加上(2～3)mL抗凝全血，1500rpm室温离心15min，吸取中间层细胞至1.5mL eppendorf管，加入生理盐水1mL，4000rpm离心2min，倒去上清，加入生理盐水100μL，充分振荡形成细胞悬液，直至没有细胞团块(重要)；b．组织块：剪切成小块后放入平皿(置冰袋上预冷)中的钢网上，加入DEPC处理的PBS或生理盐水(约1mL/30mg组织)，用研磨棒将组织研磨挤压过钢网，收集过网悬液，取100μL放入eppendorf管中(也可采用液氮中捣碎或冰浴中匀浆的方法)；c．培养细胞：悬浮细胞离心后留下细胞团块和适量上清(100μL/2×106细胞)，充分震荡直至没有细胞团块(重要)。取100μL放入eppendorf管中；贴壁细胞消化后处理同上。d．采用细胞浆RNA提取方法时，取上述组织研磨液或各类细胞悬液离心(2000rpm×2min)，去除上清后充分振荡致细胞团松散，加入RA1液(100μL/1×107细胞或30mg组织)，充分振荡混匀30s，再离心30s，吸取100μL上清液放入新的eppendorf管中；e．体液及其它液体性样本：尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取(1～10)mL，离心2min，留下沉淀及约100μL上清，充分震荡悬浮沉淀；有时也可以直接取样本100μL； f．细菌：培养良好的细菌菌液1mL，离心后留下细菌团块及大约100μL上清，充分振荡悬浮细菌，直至没有细胞团块(重要)。处理好的样本中，加入RA2液500μL，充分颠倒混匀1min。将样本裂解物吸入或倒入内套管，离心1min。弃去外套管中液体，内套管中加入500 μL洗液，离心1min。重复此过程洗一次。取出内套管，弃去外套管中液体，仍然套回内套管，不加洗液，离心1min。将内套管移入新的eppendorf管中，在膜中央加入洗脱液(或pH7.0的DEPC处理水)(25-50)μL，室温静置1min，离心1min，获得总RNA。注意事项离心速度均为12000rpm～14000rpm，室温离心(有条件可4℃离心)。以eppendorf 5417离心机为例，12000rpm=13362g，其它类型离心机转速应达到相近的g数。首次使用时在洗液瓶中加入45mL无污染的分析纯无水乙醇，用后拧紧瓶盖。避免环境中RNA酶污染，操作要戴手套，所有枪头和eppendorf管以DEPC水处理，移液枪保证洁净无RNA酶污染。如果把试剂放在超净台(普通超净台或专用的桌面PCR超净台)中操作，可以有效减少RNA酶污染。血液抽取后应在4小时内提取RNA。冻存的血液RNA大部分丢失，不能用于提取。如果不能尽快提取，可以先用淋巴细胞分离液分离获得细胞后(包括其它的细胞、组织)，保存在RNA保存液(RNAwait)中。如果试剂盒主要用于提取全血或骨髓RNA，建议采用RNA fast1000(全血样本1mL～2mL)、RNAfast2000(全血样本2mL～10mL)。对细胞量2×106以下，或组织6mg以下，按照上述标准流程操作；对更多量的细胞和组织，有以下两种方案：a.提取细胞浆RNA(操作流程1d)，可以一次处理1×107细胞、30mg组织(甚至更大量)。由于RNA 90%以上存在于细胞胞浆中，因而此方法可以提取获得绝大部分RNA，除有特殊要求提取其它部位RNA的实验外，一般均可选用此方法；b.按细胞量每2×106，或组织每6mg加入RA2液600μL。例如1×107细胞加入RA2液3000μL，充分颠倒混匀2min，分5次取600μL移入同一内套管离心；或者分取600μL同时加入5支内套管离心。后续提取过程按照上述标准流程操作。有时实验者发现样本中加入RA2液后，出现白色絮状、丝状沉淀，这是由于加入RA2液前没有充分振荡混匀细胞悬液或细胞量过大，将影响RNA的得率。样本裂解物加入内套管中离心1min结束后，如管中仍有液体，表明样本超量或裂解不完全导致吸附膜阻塞。处理方案是：a.减少样本量；b.加入RA2液后充分震荡；c.如已发生阻塞又不想放弃此标本，可用加样枪头划破内套管膜的表层，再重新离心1min。尽量保证在膜中央加入洗脱液，低于25μL将不能保证吸附膜被充分浸润。洗脱液pH7.0时会明显降低RNA的洗脱效率，而国内实验室用水大多呈偏酸性，自备洗脱液时应当注意。本试剂盒提供的洗脱液为pH7.6。如果获得的总RNA出现有明显的基因组DNA污染，表明操作失误，如样本中液体量太多或太少(通常加入100μL)，或者RA2液量少于500μL(要求加入500μL～600μL)。提取的总RNA置于4℃或冰浴中，立即用于下游实验(如RT-PCR)；或立即置于-80℃冰箱保存，数天内尽快使用。无论采用何种方法提取和保存的RNA，都往往会被很快降解，因而建议避免提取RNA后保存。有效期到用户手上有效期应≥6个月。（三）、合同包1品目号1-3：磁珠法病毒核酸提取试剂盒规格64次/盒，试剂已分装成96孔板，16样/板。利用磁珠吸附原理，从病毒样本中提取RNA/DNA试剂。适用于天隆32通道自动核酸提取仪器，不需人工分装，直接上样。保存4℃保存，其中ProteCtion K、AcryL Carrier为-20℃保存，有效期为一年。提取步骤使用方法和自动化程序编程：在96孔板的第1及第7排中加入200μL样品，10μL ProteinaseK、4μL AcryL Carrier；依下列表格，在核酸提取仪上编程：步骤槽位名称等待时间(min)混合时间(min)磁吸时间(s)混合速度体积(μL)11裂解01560中53422洗涤10260中50033洗涤20260中50044洗涤30030中55056洗脱220中10066洗脱6260中10072弃磁珠010中500按以下程序进行自动化提取实验DNA提取时，加热设置： 裂解温度一：70℃；共运行步骤：1； 裂解温度二：0℃；共运行步骤：0；洗脱温度：80℃，ON；洗脱开始加温步骤：2，ON。RNA提取时，加热设置：裂解温度一：0℃；共运行步骤：0；裂解温度二：0℃；共运行步骤：0；洗脱温度：0℃，OFF；洗脱开始加温步骤：0，OFF。自动化程序结束后，将第6及第12排的洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管。有效期到用户手上有效期应≥6个月。（四）、合同包1品目号1-4：牛白血病(BLV)抗体检测试剂盒用途用于直接检测牛或水牛血清中(单独或混合血清)白血病gP-51抗体。提供出厂合格证书。实验原理微量滴定板已经用BLV病毒gP-51抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与gP-51抗原剩余点位结合，形成复合物。经过洗板，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比。若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。试剂盒内容微量滴定板，已用伪BLV病毒抗原包被；酶结合物浓缩液(10X)；阳性对照；阴性对照；稀释缓冲液2；浓缩洗涤液(20X)；底物溶液；终止液(H2SO4 0.5M)。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项:严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有试剂使用前应净化消毒。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18～25)℃并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)血清孵育短时间孵育 孔A1和B1分别加入50μL阳性对照孔C1和D1分别加入50μL阴性对照剩下其他孔内加入50μL待检测样品21℃(±5℃)下孵育45min±4min过夜孵育每孔加入90μL样品稀释液2孔A1和B1分别加入10μL阳性对照孔C1和D1分别加入10μL阴性对照剩下其他孔内加入10μL待检测样品21℃(±5℃)下过夜孵育16-20小时3)过夜孵育或是短时间孵育，以下步骤相同4)用稀释液缓冲液2按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液)。5)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。6)21℃(±5℃)下孵育30±3min。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔5次，洗涤过程中避免孔壁变干。8)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。9)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15±2min。10)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。11)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD大于0.7，ODNC0.7阳性对照平均OD值小于阴性对照的30%，ODPC/ODNC＜0.3。结果判定对于每个样品，计算其S/N百分比(S/N) 每个样品得出一个(S/N)值结果S/N≤50%阳性50＜S/N＜60%可疑S/N≥60%阴性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（五）、合同包1品目号1-5：蓝舌病(BTV, Bluetongue)抗体ELISA一步法检测试剂盒 规格96孔╳4板/盒。提供出厂合格证书。酶结合物浓缩液(10 X)，阳性对照，阴性对照，样品稀释液2，浓缩洗涤液(20 X)，底物溶液，终止液(H2SO4 0.5M)。试剂盒出厂合格证明。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器：10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器；一次性移液器吸头；96孔酶标仪；蒸馏水；手动或自动洗涤设备。注意事项:严禁用嘴吸液底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18℃～25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤： 在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。加样：1)每孔加入50μL样品稀释液2。2)孔A1和B1分别加入50μL阳性对照。3)孔C1和D1分别加入50μL阴性对照。4)剩下孔内加入50μL样品用于检测。5)21℃(±5℃)下孵育45min±4min。6)用样品稀释液2按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液)。*不要空板或洗板7)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。8)21℃(±5℃)下孵育30min±3min。9)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。10)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。11)21℃(±5℃)下暗处孵育15min±2min。12)在每孔中加入100μL的终止液终止显色反应。13)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD 大于0.7ODNC 0.7阳性对照平均OD值小于阴性对照的30%ODPC/ ODNC＜0.3结果判定对于每个样品，计算其竞争百分比(S/N) 每个样品得出一个(S/N%)值结果Competition %＜40%阳性Competition % ≥40%阴性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（六）、合同包1品目号1-6：牛传染性鼻气管炎(IBR)检测试剂盒规格96孔╳4板/盒。提供出厂合格证书。微量滴定板，已用纯化BHV-1包被(6条16孔)，结合物浓缩液(10X)，阳性对照：0.5mL，阴性对照：1mL，稀释缓冲液2：60mL，稀释缓冲液3：60mL浓缩洗涤液(20X)：60mL，底物溶液：60mL，终止液(H2SO4 0.5M)：60mL。试剂盒出厂合格证明。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。洗涤液和稀释缓冲液可用于ID VET所有系列产品。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18℃～25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)*检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)每孔加入90μL稀释缓冲液2。3)孔A1和B1分别加入10μ阴性对照。4)孔C1和D1分别加入10μL阳性对照。5)剩下孔内加入10μL样品用于检测6)短时孵育37℃(±3℃)下孵育45min±4min，或16h～20h 21℃(±5℃)过夜孵育。7)用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8)用稀释缓冲液3按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份稀释缓冲液用于短时孵育使用；或1：20的比例的稀释浓缩酶标结合物，用于过夜孵育加板。9)吸取100μL稀释的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。10)37℃(±3℃)下孵育30min±3min。11)重复步骤3洗板。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃(±5℃)下暗室内孵育15min±2min。14)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD 大于0.350；ODPC 0.350阳性对照与阴性对照平均OD值比值大于3；ODPC/ ODNC3。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 每个样品得出一个(S/P)值：S/P 45%阴性，45%≤S/P50%可疑，S/P≥50%阳性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（七）、合同包1品目号1-7：牛病毒性腹泻/粘膜病BVD P80抗体一步法检测试剂盒规格96孔╳4板/盒，用于BVDV抗体的检测。提供出厂合格证书。微孔板(包被p80-125 Mab)，酶标结合物浓缩液(10X)，阳性对照，阴性对照，样品稀释液4，浓缩洗涤液(20X)，底物溶液，终止液(H2SO4 0.5M)试剂盒出厂合格证明。酶标结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18℃～25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)。检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温21℃(±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)孔A1和B1分别加入50μL阳性对照。3)孔C1和D1分别加入50μL阴性对照。4)剩下其他孔内加入50μL待检测样品。5)只有当微孔加入酶标结合物时反应才开始用稀释液缓冲液4(1X)按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩液加9份稀释液)每个孔加入100μL稀释的酶标结合物。6)孵育60 min，21℃(±5℃)。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。8)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。9)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15±5min。10)在每孔中加入100μL 的终止液，终止反应。11)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD 大于0.7，ODNC 0.7。阳性对照平均OD值小于阴性对照的50%，ODPC/ ODNC＜0.3结果判定对于每个样品，计算其S/N百分比(Competition %)。 每个样品得出一个(Competition %)值结果Competition %≤50%阳性50%＜Competition %≤60%可疑Competition `%阳性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（八）、合同包1品目号1-8：禽结核分枝杆菌检测试剂盒用途用于直接检测血清或肉品中禽结核分枝杆菌抗体。*提供出厂合格证书。规格96孔╳4板/盒。酶结合物浓缩液(10X)，阳性对照，阴性对照，样品稀释液19，浓缩洗涤液(20X)，底物溶液，终止液(H2SO4 0.5M)。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。原理该试剂盒的使用方法获得OIE收录推荐（见OIE建议方法:"建议诊断技术与要求操作手册第三卷-副结核5B/009)微量滴定板已经用MAC纯化提取物包被。为了避免交叉反应，样品在加到微孔前在中和缓冲液内预孵化。加入微孔后，如果样品存在MAC的抗体，将与MAC表位结合形成抗原-抗体复合物。加入过氧化物酶结合物（A multi-species peroxidase (Po)conjugate），它结合抗体表位，形成抗原-抗体-结合物复合物。洗板，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成正比若存在抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。无抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。1. 酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃（±3℃）下贮存。2. 其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。3. 相同编号的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料1. 微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。2. 一次性移液器吸头。3. 96孔酶标仪。4. 蒸馏水5. 手动或自动洗涤设备。注意事项:1. 严禁用嘴吸液2. 底物对皮肤有刺激作用。3. 终止液（H2SO4 0.5M）可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。4. 避免底物照到强光或接触到氧化物。5. 所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液（20X）使用前恢复至室温（18-25℃）并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液（20X）制备洗涤液（1X）（1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水）检测步骤在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。血清和血浆样品-稀释1/12。在96孔预稀释板内，样品和质控用稀释缓冲液6稀释1/12。1.加样：孔A1和B1分别加入10μL阴性对照。孔C1和D1分别加入10μL阳性对照。剩下孔内加入10μL样品用于检测所有孔内加入110μL稀释缓冲液6。注：如果保持上面的比率不变，可以加入更大量的缓冲液6和样品。例如：加入15ul样品质控和165ul缓冲液6。肉汁样品-稀释1/2，在96孔预稀释板内，稀释缓冲液6稀释样品1/2。1.加样：孔A1和B1分别加入10μL阴性对照和110ul稀释缓冲液6。孔C1和D1分别加入10μL阳性对照和110ul稀释缓冲液6。剩下孔内加入60μL样品和60ul稀释缓冲液6。以下程序步骤相同：21℃（±5℃）下孵育5min至45min。吸取100ul以上预先稀释孵育的样品和质控转到ELISA微孔板。21℃（±5℃）下孵育45min±4min（短时孵育）或21℃（±5℃）过夜孵育。5. 用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。6.用样品稀释液3稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物1/10（短时孵育）或1/25（过夜孵育）。7.吸取100μL的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。8.21℃（±5℃）下孵育30min±3min。9.重复步骤5，洗板步骤。10.吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。11.21℃（±5℃）下暗室内孵育15min±2min。12.在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。13.在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性：在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD 大于0.350.ODPC0.350，阳性对照与阴性对照平均OD值比值大于3ODPC/ ODNC 3结果判定：对于每个样品，计算其S/P百分比（S/P）每个样品得出一个（S/P）血清血浆样品：值结果S/P≤60%阴性60%S/P 70%可疑S/P ≥ 70%阳性肉样：值结果S/P≤25%阴性25%S/P 30%可疑S/P ≥ 30%阳性 （九）、合同包1品目号1-9：AKA(Akabane)抗体ELisa检测试剂盒用途用于直接检测血清中赤羽病病毒g1抗体。提供出厂合格证书。规格96孔╳4板/盒。酶结合物浓缩液(10X)，阳性对照，阴性对照，样品稀释液19，浓缩洗涤液(20X)，底物溶液，终止液(H2SO4 0.5M)。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器：10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项1. 严禁用嘴吸液2. 底物对皮肤有刺激作用。3. 终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。4. 避免底物照到强光或接触到氧化物。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18～25)℃并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)每孔加入25μL样品稀释液19。注意：样品稀释液19中含有显色剂，加入样品后，颜色变成蓝色。3)孔A1和B1分别加入25μL阳性对照。4)孔C1和D1分别加入25μL阴性对照。5)剩下孔内加入25μL样品用于检测。6)37℃(±2℃)下孵育90min±5min。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8)用样品稀释液19按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液)。9)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。10)37℃(±2℃)下孵育30min。11)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃(±5℃)下暗室内孵育15min。14)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD 大于0.6。ODNC0.6阳性对照平均OD值小于阴性对照的50%。OD PC/ ODNC＜0.5结果判定对于每个样品，计算其S/N百分比(S/N) 每个样品得出一个(S/N)值结果S/N＜30%阳性30≤S/N＜40%可疑S/N≥40%阴性有效期到用户手上有效期应≥12个月。 （十）、合同包1品目号1-10：SBV(Schmallenberg virus)抗体ELisa检测试剂盒规格96孔╳10板/盒针对施马伦贝格病毒(SBV)的抗体，可用于检测绵羊、山羊、牛的单独的血清或血浆。提供出厂合格证书。微量滴定板，已用SBV重组核蛋白包被，酶结合物浓缩液(10X)，阳性对照，阴性对照，样品稀释液14，样品稀释液3，浓缩洗涤液(20X)，底物溶液，终止液(H2SO4 0.5M)。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同编号的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器：10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18～25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)。检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)所有孔内加入90μL稀释缓冲液14。3)孔A1和B1分别加入10μL阴性对照。4)孔C1和D1分别加入10μL阳性对照。5)剩下孔内加入10μL样品用于检测。6)手动或是微孔板振荡器混合微孔内的溶液。7)21℃(±5℃)下孵育(45±5)min。8)用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。9)用样品稀释液3稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物1/1010)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。11)21℃(±5℃)下孵育30min±3min。12)重复洗板步骤。13)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。14)21℃(±5℃)下暗室内孵育15min±2min。15)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。16)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD 大于0.350。ODPC0.350阳性对照与阴性对照平均OD值比值大于3。OD PC/ ODNC3结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 每个样品得出一个(S/P)值结果S/P≤50%阴性50%S/P≤60%可疑S/P60%阳性阳性结果可以通过其他的血清学方法证实(病毒中和，间接免疫荧光)。有效期到用户手上有效期应≥12个月。（十一）、合同包1品目号1-11：猪瘟(Classical Swine Fever)抗体竞争法检测C-ELISA(中标单位以单板(96孔╳1板)价格换算整盒试剂)用途用于直接检测猪血清或血浆中E2糖蛋白抗体，抗体的检测显示出自然感染了该病毒或免疫接种。提供出厂合格证书。实验原理微量滴定板已经用E2糖蛋白包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与没有结合抗体的点位结合，形成抗原-酶结合物复合体。经过洗板，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比，若没有抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。稀释缓冲液18加入血清稀释后会改变颜色。试剂盒内容包被的微量滴定板；酶结合物标准液(直接使用)；阳性对照；阴性对照；稀释缓冲液18；浓缩洗涤液(20X)；底物溶液；终止液(H2SO4 0.5M)；酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存，其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器；一次性移液器吸头；酶标仪；蒸馏水或去离子水；手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液；底物对皮肤有刺激作用；终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤，若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医；避免底物照到强光或接触到氧化物；避免试剂污染。样品准备：为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18-25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)血清短时间孵育，每孔加入50μL样品稀释液18。3)孔A1和B1分别加入50μL阳性对照。4)孔C1和D1分别加入50μL阴性对照。5)剩下其他孔内加入50μL待检测样品。6)37℃(±2℃)下孵育45±4min。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8)酶标记物必须回复到室温。 吸取100μL的酶标记结合物(直接使用)加入到每孔中。9)21℃(±5℃)下孵育30±3min。10)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。11)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。12)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15min±2min。13)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。14)在酶标仪的450nm波长读取OD值。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD 大于0.7，ODNC 0.7。阳性对照平均OD值小于阴性对照的30%，ODPC/ ODNC＜0.3。结果判定对于每个样品，计算其S/N百分比(S/N) 每个样品得出一个(S/N)，短时孵育或过夜孵育的结果如下： 值结果S/N＜50%阳性50≤S/N＜60%可疑S/N≥60%阴性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（十二）、合同包1品目号1-12：猪伪狂犬病(Aujeszky)GE抗体检测C-ELISA(中标单位以单板(96孔╳1板)价格换算整盒试剂)用途用于检测猪血清或血浆中伪狂犬病毒gE抗体，抗体的检测显示是自然感染该病毒。实验原理微量滴定板已经用伪狂犬病毒抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与伪狂犬gE抗原的剩余位点结合，形成抗原-酶结合物复合体。经过洗板，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比。若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。试剂盒内容微量滴定板，已用伪狂犬gB病毒抗原包被；酶结合物标准液(直接使用)；阳性对照；阴性对照；稀释缓冲液13；浓缩洗涤液(20X)；底物溶液；终止液(H2SO4 0.5M)。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水或去离子水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18~25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)血清孵育短时间孵育 每孔加入20μL样品稀释液13孔A1和B1分别加入50μL阳性对照孔C1和D1分别加入50μL阴性对照剩下其他孔内加入50μL待检测样品37℃(±2℃)下孵育1h(30±6)min过夜孵育(可以提高检测能力)每孔加入80μL样品稀释液4孔A1和B1分别加入20μL阳性对照孔C1和D1分别加入20μL阴性对照剩下其他孔内加入20μL待检测样品21℃(±5℃)下过夜(16-20)小时3)不管过夜孵育或是短时间孵育，以下步骤相同4)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。5)吸取100μL的酶标记结合物(直接使用)加入到每孔中。6)21℃(±5℃)下孵育(30±3)min。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。8)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。9)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15min±2min。10)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。11)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD大于0.7，ODNC0.7；阳性对照平均OD值小于阴性对照的30%，ODPC/ODNC＜0.3。结果判定对于每个样品，计算其S/N百分比(S/N) 每个样品得出一个(S/N)，短时孵育或过夜孵育的结果如下：值结果S/N＜60%阳性60≤S/N＜70%可疑S/N≥70%阴性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（十三）、合同包1品目号1-13：猪伪狂犬病(Aujeszky)Gb抗体检测C-ELISA(中标单位以单板(96孔╳1板)价格换算整盒试剂)简介用于直接检测猪血清中伪狂犬gB抗体。实验原理微量滴定板已经用伪狂犬病毒抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与伪狂犬gB抗原剩余点位结合，形成复合物。经过洗板，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比。若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。注意：稀释缓冲液4加入血清稀释后会改变颜色试剂盒内容微量滴定板，已用伪狂犬gB病毒抗原包被；酶结合物浓缩液(10X)；阳性对照；阴性对照；稀释缓冲液4；稀释缓冲液3；浓缩洗涤液(20X)；底物溶液；终止液(H2SO4 0.5M)。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18-25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)血清孵育短时间孵育 每孔加入50μL样品稀释液4孔A1和B1分别加入50μL阳性对照孔C1和D1分别加入50μL阴性对照剩下其他孔内加入50μL待检测样品37℃(±2℃)下孵育45min±4min过夜孵育(可以提高检测能力)每孔加入75μL样品稀释液4孔A1和B1分别加入25μL阳性对照孔C1和D1分别加入25μL阴性对照剩下其他孔内加入25μL待检测样品21℃(±5℃)下过夜孵育16-20小时3)不过过夜孵育或是短时间孵育，以下步骤相同4)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。5)用稀释液缓冲液3按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液)。6)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。7)37℃(±2℃)下孵育30min。8)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。9)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。10)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15min。11)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。12)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD大于0.7，ODNC0.7；阳性对照平均OD值小于阴性对照的30%，ODPC/ ODNC＜0.3。结果判定对于每个样品，计算其S/N百分比(S/N) 每个样品得出一个(S/N)值结果血清样品：短时间孵育S/N＜40%阳性40≤S/N＜50%可疑S/N≥50%阴性血清样品：过夜孵育S/N＜30%阳性30≤S/N＜40%可疑S/N≥40%阴性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（十四）、合同包1品目号1-14：布氏杆菌(Brucellosis)抗体间接I-ELISA检测试剂盒 用途此试剂盒用于检测反刍动物血清或血浆中布氏杆菌抗体。样品要求可用于牛，羊血清血浆(单个样品或10样品混合)，奶样(单项或批量)实验原理微量滴定板已经用纯化的布氏杆菌包被。加入样本和对照，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。加入过氧化物酶结合物，它结合抗体点位，形成抗原-抗体-酶结合物复合体。经过洗板，加入底物TMB溶液。呈色反应是与样本中抗体含量成正比，若存在抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。无抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。试剂盒内容微量滴定板用纯化布氏杆菌裂解液包被：2块；酶结合物浓缩液(10X)：3mL；阳性对照：0.5mL；阴性对照：1mL；样品稀释液2：60mL；样品稀释液3：60mL；浓缩洗涤液(20X)：60mL；底物溶液：60mL；终止液(H2SO4 0.5M)：60mL。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存，其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器；一次性移液器吸头；96孔酶标仪；蒸馏水；手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液；底物对皮肤有刺激作用；终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。接触到皮肤或眼睛，用大量清水洗涤和就医；避免底物照到强光或接触到氧化物。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18-25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)样品孵育A.血清或血浆(单独或混合)①每孔加入190μL样品稀释液2。②孔A1和B1分别加入10μL阴性对照。③孔C1和D1分别加入10μL阳性对照。④剩下孔内加入10μL待检测样品⑤21℃(±5℃)下孵育45min±4min。⑥*对于单项的血清样品，可以过夜孵育，16-20h ，21℃(±5℃)B.牛奶样品①孔A1和B1分别加入190μL样品稀释液2和10μL阴性对照。②孔C1和D1分别加入190μL样品稀释液2和10μL阴性对照。③剩下孔内加入50μL样品稀释液2和50μL待检测样品.④对于所有样品，以下步骤相同3)用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。4)酶标溶液制备。用样品稀释液3按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液)。5)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。6)21℃(±5℃)下孵育30min±3min。7)重复步骤3，洗板。8)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。9)21℃(±5℃)下暗室内孵育15min±2min。10)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。11)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD大于0.350，ODPC0.350；阳性对照与阴性对照平均OD值比值大于3，ODPC/ODNC3。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 每个样品得出一个(S/P)1.单独的血清血浆样品，过夜或短时孵育值结果S/P≤90%阴性90%S/P 110%可疑S/P ≥ 110%阳性2.混合的10份血清或血浆值结果S/P≤20%阴性20%S/P 25%可疑S/P ≥ 25%阳性3.单独或混合的奶样值结果S/P≤25%阴性S/P25%阳性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（十五）、合同包1品目号1-15：布氏杆菌(Brucellosis)抗体竞争C-ELISA检测试剂盒 规格96孔╳2板/盒。试剂盒成分流产布氏杆菌S-LPS抗原(非感染性)包被的微量板(密封并干燥保存)；冻干单克隆抗体；辣根过氧化酶(HRP)标记二抗(羊抗鼠)，即用；20倍浓缩吐温磷酸盐缓冲液(PBS-Tween)；样本稀释缓冲液；底物溶液(含H2O2的四甲基联苯胺底物缓冲液)，避光贮存；终止液–含硫酸，有腐蚀性；A阳性对照血清–含0.05%硫柳汞；B阴性对照血清–含0.05%硫柳汞；C弱阳性对照血清–含0.05%硫柳汞。样本制备 每个样本孔需要5μL血清或血浆。可以检测新鲜、冷藏或冷冻的血清或血浆。试剂制备PBS-Tween缓冲液：以蒸馏水20倍稀释PBS-Tween浓缩缓冲液。每个微量板制备500mL，取25mL 20倍浓缩PBS-Tween原液，加475mL蒸馏水，混合均匀。注意：请检查瓶中是否有结晶出现。若出现结晶，请浴热并摇匀。 单克隆抗体溶液:以6mL样本稀释缓冲液溶解冻干单抗。将缓冲液小心加入小瓶中。即配即用。轻轻混匀，不要使用漩涡混合器。 操作步骤 1)使用前所有试剂应回温至室温(18～25)°C。 2)在微量板孔内加入45μL样本稀释缓冲液。 3)加入5μL血清对照。适当孔内加入阳性对照、弱阳性对照和阴性对照。 4)在2个适当的孔内加入5μL样本稀释缓冲液(作为酶标二抗对照)。 5)在每个适当的孔内加入5μL待检样本，样本设重复。6)在用于对照和样本的所有孔内加入50μL单抗溶液。(注：单抗溶液加入对照和样本的时间差不能超过10min)。7)将微量板密封后于振荡5min或者轻轻磕击微量板以充分混合。 8)室温(18－25)℃孵育30min。9)以PBS-Tween缓冲液将微量板/条洗涤4次。每次洗涤应将孔充满，空净，叩板以除去全部液体。 10)每孔中加入100μL酶标二抗，将微量板密封后于室温条件下(18～25)℃孵育30min。 11)重复洗涤步骤。 12)每孔中加入100μL底物溶液，并于室温条件下(18～25)℃孵育10min。 13)每孔中加入50μL终止液，混合均匀，终止反应。 14)于450nm酶标仪读取对照和样本的光密度值(OD)，以空气作为空白。应在加入终止液后15min内读取OD值，以避免OD值的波动。 计算 计算每一对照和样本的平均OD值。 按照下列公式计算对照和样本的阻断率(PI): PI = 100-(平均OD样本/对照╳100)/平均OD酶标二抗对照例：PI =100-(0.300*100)/1.030 =70.9%结果解释 试验有效性标准，为保证试验有效，对照的值必须在如下范围内： ODC：0.75～2.0 PI阳性对照：80～100 PI弱阳性对照：30～70 PI阴性对照：(-10)～15 对于无效试验，应检查试验过程并重复试验。 检测样本按照如下标准判定： PI30％：阴性；PI≥30％：阳性。有效期到用户手上有效期应≥6个月。（十六）、合同包1品目号1-16：猪胸膜肺炎(APP)筛选(血清学1-12型)、2型I-ELISA、1-9-11型I-ELISA、4-7型I-ELISA、3-6-8型I-ELISA、2-6型I-ELISA、2-6-12型I-ELISA、5型I-ELISA、10型I-ELISA、12型I-ELISA用途检测猪放线杆菌胸膜肺炎(APP)，可以检测猪血清中所有血清型APP抗体(1-12型)。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。*相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤(R35)。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18～25)℃并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)血清样品检测：孔A1和B1分别加入100μL阴性对照。孔C1和D1分别加入100μL阳性对照。剩下其他孔内加入250μL样品稀释液2和5μL待检测样品。3)肉汁样品检测：孔A1和B1分别加入100μL阴性对照。孔C1和D1分别加入100μL阳性对照。剩下其他孔内加入50μL洗涤缓冲液和50μL待检测样品。4)对所有样品类型：孵育30 min±3 min at 21°C (±5°C).5)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。6)用洗涤液缓冲液(1X)按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份稀释液)。7)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。8)孵育30 min±3 min at 21°C (±5°C)。9)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。10)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。11)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15min±2 min。12)在每孔中加入100μL的终止液终止显色反应。13)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD大于0.35，ODPC 0.35；阴性对照平均OD值小于阳性对照的30%，ODNC/ODPC＜0.3。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P)每个样品得出一个(S/P)值结果S/P＜25%阴性25≤S/P＜30%可疑S/P≥30%阳性有效期到用户手上有效期应≥6个月。（十七）、合同包1品目号1-17：流感A型(Influenza A)抗原捕获ELISA用途快速检测血清中流感病毒A型抗原。可检测猪类、禽类、马类等的肺液；禽类的生殖腔采样棉拭子和粪便。实验原理微量滴定板已经用A型抗原(Ag A)的单克隆抗体(Mab)包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗原(Ag A)，将形成抗原-抗体复合物。加入过氧化物酶结合物，它结合抗原的点位，形成抗原-酶结合物复合体。经过洗板洗掉没结合的酶结合物，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗原含量成正比。若有抗原，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。没有抗原存在的情况下将不呈现任何显色反应。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤(R35)。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医(S26)。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18~25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)拭子：每个采样拭子浸泡在500μL稀释缓冲液2；肺液： 1/2稀释样品稀释缓冲液2；粪便：1/10稀释样品稀释缓冲液2。3)100μL阳性对照加入孔A1和B1。4)100μL阴性对照加入孔C1和D1。5)剩下孔内加入100μL样品用于检测。6)21℃(±5℃)下孵育25±2min。不要空板或洗板。7)用样品稀释液2按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液)。8)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。9)21℃(±5℃)下孵育25min±2min。10)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔5次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。11)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。12)21℃(±5℃)下暗处孵育10min±1min。13)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。14)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD大于0.350，ODPC 0.350。阳性对照平均OD值和阴性对照平均OD值的比值大于3，ODPC/ODNC＞3。结果判定Cut-off值固定为4倍的阴性质控平均OD值：Cut-off=4╳MeanODNC每个样品的判定≤Cut-off阴性＞Cut-off阳性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（十八）、合同包1品目号1-18：梅迪维斯纳/山羊关节炎(MVV/CAEV)确认I-ELISA用途间接酶联免疫法检测绵羊血清或血浆中梅斯维斯纳病毒（MVV）抗体，山羊血清血浆中关节脑炎病毒(CAEV) 抗体。实验原理微量滴定板已经用MVV/CAEV基因组肽包被。加入样本和对照，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它结合抗体，形成抗原-抗体-酶结合物复合体。经过洗板，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成正比。若存在抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。无抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃（±3℃）下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。洗涤液和稀释缓冲液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水或去离子水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18℃～25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)每孔加入190μL稀释缓冲液13。3)孔A1和B1分别加入10μ阴性对照。4)孔C1和D1分别加入10μL阳性对照。5)剩下孔内加入10μL样品用于检测。（为了提高在稀释缓冲液的均一性和试验的重复性，建议加入血清后振动板1分钟/500下）。 6)21℃（±5℃）下孵育45min±4min。7)用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8)用稀释缓冲液3按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1份浓缩洗涤液加9份稀释缓冲液用于短时孵育使用；或1：20的比例的稀释浓缩酶标结合物，用于过夜孵育加板。9)吸取100μL稀释的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。10)21℃（±5℃）下孵育30min±3min。11)重复步骤3洗板。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃（±5℃）下暗室内孵育15min±2min。14)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性：在下列情形下实验有效：在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD 大于0.350；ODPC 0.350阳性对照与阴性对照平均OD值比值大于3；ODPC/ ODNC3。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 每个样品得出一个(S/P)值：每个样品得出一个（S/P）值结果S/P ≤50%阴性50% S/P≤60%可疑 S/P 60%阳性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（十九）、合同包1品目号1-19：流感N1型(Influenza N1)抗体竞争ELISA用途用于检测禽类血清中流感病毒N1抗体，抗体的检测显示是自然感染该病毒。实验原理微量滴定板已经用N1抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与没结合抗体的点位结合，形成抗原-酶结合物复合体。经过洗板洗掉没结合的酶结合物，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比。若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水或去离子水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18-25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)每孔加入50μL样品稀释液8。3)孔A1和B1分别加入50μL阳性对照。4)孔C1和D1分别加入50μL阴性对照。5)剩下孔内加入50μL样品用于检测。6)37℃（±2℃）下孵育1h30min±5min。注意：乳白色或浑浊不清的血清1/5稀释代替1/2稀释。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8)用样品稀释液3按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液）。9)吸取100μL的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。10)21℃（±5℃）下孵育30min±2min。11)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃（±5℃）下暗处孵育10min±1min。14)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD大于0.7，ODNC0.7；阳性对照平均OD值小于阴性对照的30%，ODPC/ODNC＜0.3。结果判定对于每个样品，计算其S/N百分比(S/N) 每个样品得出一个(S/N)，短时孵育或过夜孵育的结果如下：值结果S/N＜60%阳性S/N≥60%阴性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（二十）、合同包1品目号1-20：流感N2型(Influenza N2)抗体竞争ELISA用途用于检测禽类血清中流感病毒N2抗体，抗体的检测显示是自然感染该病毒。实验原理微量滴定板已经用N2抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与没结合抗体的点位结合，形成抗原-酶结合物复合体。经过洗板洗掉没结合的酶结合物，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比。若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水或去离子水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18-25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)每孔加入50μL样品稀释液8。3)孔A1和B1分别加入50μL阳性对照。4)孔C1和D1分别加入50μL阴性对照。5)剩下孔内加入50μL样品用于检测。6)37℃（±2℃）下孵育1h30min±5min。注意：乳白色或浑浊不清的血清1/5稀释代替1/2稀释。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8)用样品稀释液3按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液）。9)吸取100μL的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。10)21℃（±5℃）下孵育30min±2min。11)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃（±5℃）下暗处孵育10min±1min。14)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD大于0.7，ODNC0.7；阳性对照平均OD值小于阴性对照的30%，ODPC/ODNC＜0.3。结果判定对于每个样品，计算其S/N百分比(S/N) 每个样品得出一个(S/N)，短时孵育或过夜孵育的结果如下：值结果S/N≤50%阳性50%＜S/N＜60%可疑S/N≥60%阴性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（二十一）、合同包1品目号1-21：猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)抗体I-ELISA检测试剂盒用途间接酶联免疫法检测猪血清中肺炎支原体P46抗体。实验原理微量滴定板已经用P46支原体抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与APP抗原-抗体结合物再结合。洗板洗掉过量没结合的，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成正比。若存在抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。无抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。试剂盒内容微孔板(包被P46抗原)；酶结合物浓缩液(10X)；阳性对照；阴性对照；稀释缓冲液11；稀释缓冲液5；浓缩洗涤液(20X)；底物溶液；终止液(H2SO4 0.5 M)。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤(R35)。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18-25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀2)每孔加入190μL样品稀释液11。3)孔A1和B1分别加入10μL阴性对照。4)孔C1和D1分别加入10μL阳性对照。5)剩下其他孔内加入10μL待检测样品。6)孵育45 min±4 min at 21°C (±5°C)。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。8)用稀释液缓冲液5按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份稀释液)。9)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。10)孵育30 min±3 min at 21°C (±5°C).11)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15min±2 min。14)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阳性对照的OD和阴性对照的OD差值大于0.15，ODPC-ODNC≥0.15；阴性对照平均OD值小于0.15，ODNC≤0.15。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 每个样品得出一个(S/P)值结果S/P＜0.3阴性0.3≤S/P＜0.4可疑S/P≥0.4阳性（二十二）、合同包1品目号1-22：犬瘟热抗体ELISA检测试剂盒用途犬血清或血浆中犬瘟热病毒特异性抗体。原理将抗原包被于固相载体(聚苯乙烯微孔板)。若血清样品中含CPV特异性抗体，其将与包被的抗原结合并吸附于微孔板上；洗涤去除未发生结合的成分，加入过氧化物酶结合物，其将与血清中的CPV特异性抗体结合，后加入底物，底物将与结合物中的过氧化物酶发生比色反映，该比色反应用酶标仪进行检测。在该方法检测结果中，比色反应的发生，表明血清中含有CPV特异性抗体，反之没有CPV特异性抗体。该试剂盒微孔板中所包被的抗原为昆虫细胞中杆状病毒所表达的病毒蛋白，该方法确保了试剂盒不具有该疾病的传染性。注意事项使用前仔细阅读说明书。使用时，提前将所有试剂恢复至室温(20℃-25℃)。禁止混同使用其他试剂盒的说明述或试剂。避免试剂试剂污染。禁止使用过期试剂和混合不同批次的试剂。处理样本或试剂盒时，禁止吃、喝或抽烟。不要经口移液。使用一次移液器吸头处理样品。每次使用试剂盒时，均要对阳性和阴性对照血清进行系统检测。小心处理底物及终止液。试剂保存所有试剂 4℃保存。洗涤步骤可使用自动洗板机或多通道移液器，每孔加入300μL 洗涤液进行洗涤。孵育完后，务必按下述步骤所述进行洗涤：迅速翻转微孔板将孔内溶液甩出，避免孔间交叉污染。每孔加入300μL的洗涤液轻摇微孔板充分洗涤，避免孔间交叉污染。迅速翻转微孔板板甩出洗涤液。按说明书上指定次数，重复上述操作。最后一次洗涤去除洗涤液前，确保将要添加的试剂可直接使用。勿使微孔板处于干燥状态下的时间超出规定时限。最后一次洗涤后，将微孔板倒置于吸水纸上轻轻拍干。样品准备血清样品需与稀释液以1/100比例进行稀释(5μL血清加0.5 mL稀释液)洗涤液：将1体积的浓缩洗涤液与9体积的蒸馏水或去离子水混合制得工作洗涤液。配制好后， 4℃保存。阳性对照和阴性对照的制备：对照血清可直接使用，不需稀释。结合物的准备：现用现配用稀释液以1/100进行稀释。一块微孔板所需结合物量为：110μL结合物加11mL稀释液。一列8 孔所需结合物量为：10μL的结合物加1mL的稀释液每次实验只准备所需要的量即可，剩余部分丢弃。结合物充分摇匀后方可使用检测步骤1)所有试剂及微孔板在使用时提前室温放置，并恢复至室温(至少提前室温放置1h)。2)任选2孔，一孔加入100μL的阳性对照，一孔加入100μL的阴性对照，剩余孔内每孔加入100μL的血清样品，建议采用双孔检测。密封、室温放置10min。3)按洗涤步骤所述洗涤4 次。4)每孔加入100 μL的结合物，密封、室温放置10min。5)按洗涤步骤所述洗涤4 次。6)每孔加入100μL底物溶液，室温放置5min。7)每孔加入100μL终止液。8)酶标仪450nm处读取OD 值。结果读取及判定结果有效性450nm OD( )＞1.2，450nm DO(-)＜0.15。结果判定S/P= OD(样品)/OD( )样品S/P＜0.15，样品呈CPV抗体阴性，样品S/P＞0.15，样品呈CPV抗体阳性。阴性样品:样品OD值＜Cut Off 值? 阳性样品:样品OD值＞Cut Off 值。样品若呈抗体阳性，可分为3种。- 较低抗体滴度(与1/20-1/40间接免疫荧光值相比较)。样品OD 值介于0.2 x 阳性对照OD 与0.4 x 阳性对照OD- 中等抗体滴度(与1/80-1/160间接免疫荧光值相比较)。样品OD 值介于0.4 x 阳性对照OD 与0.8 x 阳性对照OD- 高抗体滴度(与大于1/320间接免疫荧光值相比较)。样品OD 值＞0.8 x 阳性对照OD 有效期到用户手上有效期应≥6个月。（二十三）、合同包1品目号1-23：犬细小病毒抗体I-ELISA用途犬血清或血浆中犬细小病毒特异性抗体。原理将抗原包被于固相载体(聚苯乙烯微孔板)。若血清样品中含CPV特异性抗体，其将与包被的抗原结合并吸附于微孔板上；洗涤去除未发生结合的成分，加入过氧化物酶结合物，其将与血清中的CPV特异性抗体结合，后加入底物，底物将与结合物中的过氧化物酶发生比色反映，该比色反应用酶标仪进行检测。在该方法检测结果中，比色反应的发生，表明血清中含有CPV特异性抗体，反之没有CPV特异性抗体。该试剂盒微孔板中所包被的抗原为昆虫细胞中杆状病毒所表达的病毒蛋白，该方法确保了试剂盒不具有该疾病的传染性。注意事项使用前仔细阅读说明书。使用时，提前将所有试剂恢复至室温(20℃-25℃)。禁止混同使用其他试剂盒的说明述或试剂。避免试剂试剂污染。禁止使用过期试剂和混合不同批次的试剂。处理样本或试剂盒时，禁止吃、喝或抽烟。不要经口移液。使用一次移液器吸头处理样品。每次使用试剂盒时，均要对阳性和阴性对照血清进行系统检测。小心处理底物及终止液。试剂保存所有试剂 4℃保存。洗涤步骤可使用自动洗板机或多通道移液器，每孔加入300μL 洗涤液进行洗涤。孵育完后，务必按下述步骤所述进行洗涤：迅速翻转微孔板将孔内溶液甩出，避免孔间交叉污染。每孔加入300μL的洗涤液轻摇微孔板充分洗涤，避免孔间交叉污染。迅速翻转微孔板板甩出洗涤液。按说明书上指定次数，重复上述操作。最后一次洗涤去除洗涤液前，确保将要添加的试剂可直接使用。勿使微孔板处于干燥状态下的时间超出规定时限。最后一次洗涤后，将微孔板倒置于吸水纸上轻轻拍干。样品准备血清样品需与稀释液以1/100比例进行稀释(5μL血清加0.5 mL稀释液)洗涤液：将1体积的浓缩洗涤液与9体积的蒸馏水或去离子水混合制得工作洗涤液。配制好后， 4℃保存。阳性对照和阴性对照的制备：对照血清可直接使用，不需稀释。结合物的准备：现用现配用稀释液以1/100进行稀释。一块微孔板所需结合物量为：110μL结合物加11mL稀释液。一列8 孔所需结合物量为：10μL的结合物加1mL的稀释液每次实验只准备所需要的量即可，剩余部分丢弃。结合物充分摇匀后方可使用检测步骤1)使用时，提前将所有试剂室温放置(至少2小时)。2)任选2 孔，每孔加入100μL阳性对照血，任选2 孔，没空加入100μL阴性对照血清，剩3)余孔内，每孔加入100μL的血清样品(为确保结果的准确性，建议2 孔检测)。4)室温(18～25)℃孵育10min。5)按洗涤步骤所述洗涤3 次。6)每孔加入100μL结合物。室温18℃～25℃孵育10min。7)按洗涤步骤所述洗涤5 次。8)每孔加入100μL底物溶液，室温放置5min。9)每孔加入100μL终止液。10)450nm处读取OD值。结果读取及判定结果有效性450nm OD( )＞1.2，450nm DO(-)＜0.15。结果判定S/P= OD(样品)/OD( )样品S/P＜0.15，样品呈CPV 抗体阴性，样品S/P＞0.15，样品呈CPV 抗体阳性。样品抗体滴度计算：Y (titre) = 54 (e4x)e 为自然对数(2.718282)x 样品S/P 值.EXAMPLE：OD( )为1.764OD(-)为0.08样品OD1.202(S/P = 0.681)因OD( )＞1.2，且OD(-)＜0.15，顾检测结果有效。样品滴度为：TITRE (y) =54×e4 ×0.681 = 824有效期到用户手上有效期应≥6个月。 （二十四）、合同包1品目号1-24：犬利什曼抗体检测试剂盒用途 ELISA试剂盒检测犬利什曼原虫抗体。实验原理微量滴定板已经用提纯的利什曼原虫抗原（依据OIE操作手册制备(OIE Terrestrial Manual 2008, CHP 2.1.8, part B-2-b) )包被。加入样本和对照，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。加入过氧化物酶结合物，它结合抗体点位，形成抗原-抗体-酶结合物复合体。经过洗板，加入底物TMB溶液。呈色反应是与样本中抗体含量成正比若存在抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。无抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。1. 酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃（±3℃）下贮存。2. 其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。3. 洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料1. 微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。2. 一次性移液器吸头。3. 96孔酶标仪。4. 蒸馏水5. 手动或自动洗涤设备。注意事项1. 严禁用嘴吸液2. 底物对皮肤有刺激作用。3. 终止液（H2SO4 0.5M）可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。4. 避免底物照到强光或接触到氧化物。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液（20X）使用前恢复至室温（18-25℃）并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液（20X）制备洗涤液（1X）（1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水）检测步骤 在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。 样品孵育 A. 血清或血浆（1:20稀释）每孔加入190μL样品稀释液11。孔A1和B1分别加入10μL阴性对照。孔C1和D1分别加入10μL阳性对照。剩下孔内加入10μL待检测样品 B. 肉汁（1:2稀释）孔A1和B1分别加入190μL样品稀释液2和10μL阴性对照。孔C1和D1分别加入190μL样品稀释液2和10μL阴性对照。剩下孔内加入50μL样品稀释液2和50μL待检测样品.2.37℃（±2℃）下孵育45min±4min。3.洗板。用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。4.酶标溶液制备。用样品稀释液3按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液）。5.吸取100μL的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。6.37℃（±2℃）下孵育30min±3min。7.重复步骤3，洗板。8.吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。9.21℃（±5℃）下暗室内孵育15min±2min。10.在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。11.在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性：在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD 大于0.350.ODPC0.350阳性对照与阴性对照平均OD值比值大于3OD PC/ ODNC3结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比（S/P）每个样品得出一个（S/P）1.单独的血清血浆样品，过夜或短时孵育值结果S/P≤40%阴性40%S/P50%可疑 S/P ≥50%阳性注：可以样品需要用荧光免疫试剂盒检测已确认最终状态。（二十五）、合同包1品目号1-25：马传染性贫血(Equine Infectious Anemia)抗体ELISA用途试剂盒用于检测马血清中马传染性贫血病毒(EAIV)抗体。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器：10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备：为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18-25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)检测步骤：1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。2)每孔加入50μL样品稀释液13。3)孔A1和B1分别加入50μL阴性对照。4)孔C1和D1分别加入50μL阳性对照。5)剩下孔内加入50μL待检测样品6)21℃(±5℃)下孵育45min±4min。7)洗板。用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8)酶标溶液制备。用样品稀释液19按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液)。9)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。10)21℃(±5℃)下孵育30min±3min。11)重复步骤3，洗板。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃(±5℃)下暗室内孵育15min±2min。14)在每孔中加入100μL 的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性在下列情形下实验有效：阳性对照的平均OD 大于0.350，ODPC 0.350；阳性对照与阴性对照平均OD值比值大于3，ODPC/ODNC3。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 每个样品得出一个(S/P)单独的血清血浆样品，过夜或短时孵育值结果S/P≤50%阴性50%S/P 60%可疑S/P ≥60%阳性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（二十六）、合同包1品目号1-26：马动脉炎(Equine Viral Arteritis)抗体ELISA用途确认检测马血清中的马动脉炎(EVA)抗体。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器：10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18～25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)。检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。注意：该实验为确认试验。每份样品和对照一定要在偶数孔和其相邻的奇数孔各加一份(双孔实验)。2)每孔加入90μL样品稀释液2。3)孔A1、A2和B1、B2分别加入10μL阴性对照。4)孔C1、C2和D1、D2分别加入10μL阳性对照。5)剩下其他孔内加入10μL待检测样品。6)孵育1h30min±5min at 21℃(±5℃)。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。8)用稀释液缓冲液5按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份稀释液)。9)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。(稀释缓冲液5稀释10X酶结合物)10)孵育30min±5min at 21℃(±5℃)。11)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15min±2min。14)在每孔中加入100μL的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性计算净OD值(用于验证和解释步骤)净OD=OD偶数-OD奇数。在下列情形下实验有效阳性对照的净OD值大于0.35，净ODPC0.35；净阳性对照和净阴性对照比值大于3，净ODPC/净ODNC3。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 每个样品得出一个(S/P)值结果S/P ＜50%阴性50%＜S/P≤60%可疑S/P 60%阳性注意：如果奇数孔的样本对照OD值大于阳性对照OD值(ODPC)，结果不成立。有效期到用户手上有效期应≥12个月。（二十七）、合同包1品目号1-27：马鼻肺炎(Equine Herpesvirus)抗体I-ELISA用途马血清中马疱疹病毒特异性抗体检测。试剂盒存放所有试剂及微孔板均需 4℃保存。终止液 4℃时可能会产生沉淀，使用前将其置于 37℃温浴直至沉淀消失。洗涤步骤可以使用自动洗板机或多通道移液器，每孔加入300μl洗液进行洗涤。孵育完后，务必按以下述步骤进行洗涤：迅速翻转微孔板将孔内溶液甩出，以避免空间交叉污染。每孔中加入300μl的洗液。轻摇微孔板充分洗涤，避免孔间交叉污染。迅速翻微孔板甩出洗涤液。按说明书上指定次数，重复上述操作。最后一次洗涤去除洗涤液前，确保将要添加的试剂可直接使用，勿使微孔板置于干燥下的状态超过规定时限。最后一次洗涤后，将微孔板在吸水纸上轻轻拍干。样品制备出于筛选的目的:血清样品必需以1/100的比例进行稀释，稀释为1×。出于滴度检测目的:采用2 倍(倍比稀释)稀释法，从1/100倍稀释开始，直到所需要的稀释倍数(1/100，1/200，1/400，1/800 etc)。试剂制备? 洗涤液：将浓缩洗涤液与蒸馏水或去离子水以1：24 的比例进行稀释，配制好后， 4oC保存。? 血清稀释:将1 体积的5x 血清稀释液与4 体积的蒸馏水混合制得，配制好后， 4oC 保存。? 对照:可直接使用。? 酶结合物的准备:使用前将结合物以1/100 比例稀释成1x.? 底物溶液的制备:现用现配。将底物与底物缓冲液以1：9 的比例混合(如100μL 底物兑900 μL 底物缓冲液)。注意:结合物和底物每次使用只需准备所需要的量即可，剩余部分丢弃。检测步骤1)使用时，将所有试剂(结合物除外)提前室温放置，直至达到室温。2)每孔加入100μl样品(按照步骤V 所述制备)，进行筛选试验，建议样品3)用两孔检测。加入100μl的阳性和阴性对照于两个不同的孔。密封37℃孵育60min。4)按洗涤步骤所述清洗4次。5)每孔加入100 μl 的结合物(按制备步骤所述制备)，密封25oC 孵育30min。6)按洗涤步骤所述清洗5 次。7)每孔加入100 μl 的底物溶液(按制备步骤所述制备)，室温放置15min。8)每孔加入100 μl 终止液终止反应。建议加入终止液的顺序和加入底物溶液的顺序一致。9)405 nm 处读取结果读取及判定A.结果有效性:只有满足以下条件检测方有效：? 阳性对照OD 值＞0.8，阴性对照OD 值＜0.3。B.Cut off 值计算:? Cut off ( )=阴性对照OD 值0.3? Cut off (-) =阴性对照OD 值0.2C.结果判定:? 筛查:若检测为双空检时，OD 值取其算术平均值。? 所有样品OD 值＞CUT OFF ( )；样品呈HVE 抗体阳性。? 所有样品OD 值＜CUT OFF (-)；样品呈HVE 抗体阴性。? 介于两Cut off 值之间的OD 值样品判定为疑似。? 滴度:样品抗体滴度为OD＞Cut off ( )所对应的较高的稀释倍数所对应的样品稀释倍数值。（二十八）、合同包1品目号1-28：多物种A型流感抗体检测试剂盒用途用于检测猪类，禽类，马类等的血清。实验原理微量滴定板已经用A型抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与没结合抗体的点位结合，形成抗原-酶结合物复合体。经过洗板洗掉没结合的酶结合物，加入含底物TMB液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比。若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在450nm波长检测OD值。1. 酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃（±3℃）下贮存。2. 其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。3. 洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料1. 微量移液器，10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。2. 一次性移液器吸头。3. 96孔酶标仪。4. 蒸馏水5. 手动或自动洗涤设备。注意事项1. 严禁用嘴吸液2. 底物对皮肤有刺激作用。3. 终止液（H2SO4 0.5M）可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。4. 避免底物照到强光或接触到氧化物。5. 所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备浓缩洗涤液（20X）使用前恢复至室温（18-25℃）并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液（20X）制备洗涤液（1X）（1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水）检测步骤 在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。样本孵育该说明书是对于鸡，火鸡，鹌鹑，豚鼠，马，鸭，鸵鸟，猪等的样品。其他物样本分析制备请与IDVET联系如果该检测用于初筛，阳性样本用其他不同的技术确认，血清样本过夜孵育可能增加分析的敏感性，其他操作相同。加样：血清来源于不同物种需要不同的稀释。对于鸡，火鸡，鹌鹑，珍珠鸡，马操作如下：每孔加入90μL样品稀释液2。孔A1和B1分别加入10μL阳性对照。孔C1和D1分别加入10μL阴性对照。剩下孔内加入10μL样品用于检测对于鸭，鹅，鸵鸟，操作如下：90μL样品稀释液2和10μL阳性对照加入孔A1和B1。90μL样品稀释液2和10μL阴性对照孔加入C1和D1。190μL样品稀释液2和10μL样品加入剩下孔内。对于猪类作如下：90μL样品稀释液2和10μL阳性对照加入孔A1和B1。90μL样品稀释液2和10μL阴性对照孔加入C1和D1。200μL样品稀释液2和5μL样品加入剩下孔内。2.37℃（±2℃）下孵育1h±5min。3.甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔5次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。4.用样品稀释液3按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1份浓缩洗涤液加9份样品稀释液）。5.吸取50μL的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。6.21℃（±5℃）下孵育30min±2min。7.甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8.吸取50μL的底物溶液加入到每孔中。9.21℃（±5℃）下暗处孵育10min±1min。10.在每孔中加入50μL 的终止液终止显色反应。11.在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性：在下列情形下实验有效：阴性对照的平均OD 大于0.7ODNC0.7阳性对照平均OD值小于阴性对照的50%OD PC/ ODNC＜0.3结果判定：对于每个样品，计算其竞争百分比（competition%）ODsamplecompetition% =____________ ×100 ODNC每个样品得出一个（competition%）值结果competition%≤ 45%阳性45%＜competition%＜50%可疑competition%≥50%阴性 （二十九）、合同包1品目号1-29：马链球菌病(Streptococcus equi)抗体I-ELISA用途确认检测马血清中的马链球菌病(Streptococcus equi)抗体。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器：10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18～25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)。检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。注意：该实验为确认试验。每份样品和对照一定要在偶数孔和其相邻的奇数孔各加一份(双孔实验)。2)每孔加入90μL样品稀释液2。3)孔A1、A2和B1、B2分别加入10μL阴性对照。4)孔C1、C2和D1、D2分别加入10μL阳性对照。5)剩下其他孔内加入10μL待检测样品。6)孵育1h30min±5min at 21℃(±5℃)。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。8)用稀释液缓冲液5按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份稀释液)。9)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。(稀释缓冲液5稀释10X酶结合物)10)孵育30min±5min at 21℃(±5℃)。11)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15min±2min。14)在每孔中加入100μL的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性计算净OD值(用于验证和解释步骤)净OD=OD偶数-OD奇数。在下列情形下实验有效阳性对照的净OD值大于0.35，净ODPC0.35；净阳性对照和净阴性对照比值大于3，净ODPC/净ODNC3。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 定性操作结果判定：值结果 S/P% 100%阴性S/P% ≥ 100%阳性定量操作结果判定：如果S/P% ≥ 100%，样品在给定的滴度确认为阳性。对于给定的样品，确定最后得到阳性结果的稀释比例。阳性滴度动物状态＜1/200阴性1/200弱阳性1/800中度阳性1/3200强阳性1/12800非常强阳性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（三十）、合同包1品目号1-30：马焦虫抗体ELISA用途确认检测马血清中的马焦虫抗体。酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在5℃(±3℃)下贮存。其它试剂可放置 2℃～ 26℃保存。相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于ID VET所有系列产品。自备材料微量移液器：10μL、100μL、200μL的单道或多道微量移液器。一次性移液器吸头。96孔酶标仪。蒸馏水。手动或自动洗涤设备。注意事项严禁用嘴吸液。底物对皮肤有刺激作用。终止液(H2SO4 0.5M)可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。避免底物照到强光或接触到氧化物。所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的5%次氯酸钠溶液中最少1小时或120℃高压灭菌。样品准备为保证不同样品孵育时间一致，可用96孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到ELISA微量滴定板中。洗涤液的准备：浓缩洗涤液(20X)使用前恢复至室温(18～25℃)并充分混匀保证充分溶解。用蒸馏水按照1：20的比例的稀释浓缩洗涤液(20X)制备洗涤液(1X)(1份浓缩洗涤液加19份蒸馏水)。检测步骤1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温(21℃±5℃)。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。注意：该实验为确认试验。每份样品和对照一定要在偶数孔和其相邻的奇数孔各加一份(双孔实验)。2)每孔加入90μL样品稀释液2。3)孔A1、A2和B1、B2分别加入10μL阴性对照。4)孔C1、C2和D1、D2分别加入10μL阳性对照。5)剩下其他孔内加入10μL待检测样品。6)孵育1h30min±5min at 21℃(±5℃)。7)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。8)用稀释液缓冲液5按照1：10的比例的稀释浓缩酶标结合物(10X)制备酶标结合物(1X)(1份浓缩洗涤液加9份稀释液)。9)吸取100μL的酶标记结合物(1X)加入到每孔中。(稀释缓冲液5稀释10X酶结合物)10)孵育30min±5min at 21℃(±5℃)。11)甩干板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次，洗涤过程中避免孔壁变干。12)吸取100μL的底物溶液加入到每孔中。13)21℃(±5℃)下暗室避光孵育15min±2min。14)在每孔中加入100μL的终止液终止显色反应。15)在酶标仪的450nm波长读结果。实验有效性计算净OD值(用于验证和解释步骤)净OD=OD偶数-OD奇数。在下列情形下实验有效阳性对照的净OD值大于0.35，净ODPC0.35；净阳性对照和净阴性对照比值大于3，净ODPC/净ODNC3。结果判定对于每个样品，计算其S/P百分比(S/P) 定性操作结果判定：值结果 S/P% 100%阴性S/P% ≥ 100%阳性定量操作结果判定：如果S/P% ≥ 100%，样品在给定的滴度确认为阳性。对于给定的样品，确定最后得到阳性结果的稀释比例。阳性滴度动物状态＜1/200阴性1/200弱阳性1/800中度阳性1/3200强阳性1/12800非常强阳性有效期到用户手上有效期应≥12个月。（三十一）、合同包1品目号1-31：禽群其他疫病检测A/H5/H7/H9/ND/MD/IBD/IBV/REO/ART/EDS/AEV/ALV/ILT/CAV/BLS/等病毒一步法RT-PCR(DNA病毒为PCR法)诊断试剂盒用途用于禽A/H5/H7/H9/ND/MD等病毒的检测。试剂盒组成名称数量保存A/H5/H7/H9/ND/MD/IBD/IBV/REO/ART/EDS/AEV/ALV/ILT/CAV/BLS RT-PCR Premix1050 μL-20℃Enzyme Mix50 μL-20℃Positive ControL50 μL-20℃Negative ControL50 μL-20℃操作步骤样品RNA提取按照柱式或TRIzoL方法提取样品RNA，作为反应模板。一步法RT- PCR加样体系组份加样量RNA模板3.0 μLA/H5/H7/H9/ND/MD/IBD/IBV/REO/ART/EDS/AEV/ALV/ILT/CAV/BLS RT-PCR Premix21.0 μLEnzyme Mix1.0 μL总量25.0 μL反应程序42℃30min94℃预变性2min94℃变性30s55℃退火30s35个循环72℃延伸30s72℃延伸5min电泳将PCR产物5-10μL经1%的琼脂糖凝胶电泳，在紫外成像仪下观察结果。结果判定阴、阳性对照成立的前提下，在约370/230/255/195/455/421/322/187/279/320/560/723/649/209/317/396/456/621/586位置出现扩增带，样品为A/H5/H7/H9/ND/MD/IBD/IBV/REO/ART/EDS/AEV/ALV/ILT/CAV/BLS病毒阳性。规格、贮藏及有效期50份/盒。试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥9个月。 （三十二）、合同包1品目号1-32：畜群其他疫病检测CSFV/FMD/HP-PRRS/PRRS/PCV1&2/PPV/TGV/PED/PRV/BVDV/Pset/BLV/IBRV/BTV/BLV/ HPS (DNA病毒为PCR法)等病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒用途用于畜CSFV/FMD/HP-PRRS/PRRS/PCV/PRV/BVDV/Pset/BLV/IBRV/BTV病毒的检测。敏感性：CSFV RT-PCR能够检测猪瘟病毒。PRRSRT-PCR能够检测猪繁殖与呼吸综合征病毒。HP-PRSSRT-PCR能够检测高致病性猪蓝耳病病毒。FMDRT-PCR能够检测口蹄疫病毒。PCV2 PCR能够检测猪圆环2型病毒。PCV PCR能够检测猪圆环病毒。PPV PCR能够检测猪细小病病毒。PRV PCR能够检测猪伪狂犬病病毒。SS2 PCR能够检测猪链球菌。PRRS-HP-PRSS RT-PCR能够检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和高致病性猪蓝耳病病毒。PRV-PCV PCR能够检测猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒。PRV-PPV-PCV PCR能够检测猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒和猪细小病毒。PET-BVDV能够检测瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒。BVDV1能够检测牛病毒性腹泻病毒1型。BVDV2能够检测牛病毒性腹泻病毒2型。BVDV1-2能够检测牛病毒性腹泻病毒1型和2型。流行热/三日热？？猪传染性胃肠炎病毒/流行性腹泻病毒/轮状病毒三重核酸检测试剂盒能够检测猪传染性胃肠炎病毒/流行性腹泻病毒/轮状病毒。试剂盒组成名称数量保存CSFV/FMD/HP-PRRS/PRRS/PCV1&2/PPV/TGV/PED/PRV/BVDV/Pset/BLV/IBRV/BTV/BLV RT-PCR Premix1050 μL-20℃Enzyme Mix50 μL-20℃Positive ControL50 μL-20℃Negative ControL50 μL-20℃操作步骤样品RNA提取：按照柱式或TRIzoL方法提取样品RNA，作为反应模板一步法RT- PCR加样体系组份加样量RNA模板3.0 μLCSFV/FMD/HP-PRRS/PRRS/PCV1&2/PPV/TGV/PED/PRV/BVDV/Pset/BLV/IBRV/BTV/BLV RT-PCR Premix21.0 μLEnzyme Mix1.0 μL总量25.0 μL反应程序：42℃30min94℃预变性2min94℃变性30s55℃退火30s35个循环72℃延伸30s72℃延伸5min电泳：将PCR产物5-10μL经1%的琼脂糖凝胶电泳，在紫外成像仪下观察结果。结果判定阴、阳性对照成立的前提下，在约253/611/194/416/208/318/401/218/605/279/541/269/422/506/328位置出现扩增带，样品为CSFV/FMD/HP-PRRS/PRRS/PCV1&2/PPV/TGV/PED/PRV/BVDV/Pset/BLV/IBRV/BTV/BLV病毒阳性。规格、贮藏及有效期50份/盒。试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥9个月。（三十三）、合同包1品目号1-33：禽流感H10型抗原禽流感H10病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒用途用于禽流感H10病毒病毒的检测。试剂盒组成名称数量保存禽流感H10病毒RT-PCR Premix1050 μL-20℃Enzyme Mix50 μL-20℃Positive ControL50 μL-20℃Negative ControL50 μL-20℃操作步骤样品RNA提取按照柱式或TRIzoL方法提取样品RNA，作为反应模板。一步法RT- PCR加样体系组份加样量RNA模板3.0 μL禽流感H10病毒 RT-PCR Premix21.0 μLEnzyme Mix1.0 μL总量25.0 μL反应程序42℃30min94℃预变性2min94℃变性30s55℃退火30s35个循环72℃延伸30s72℃延伸5min电泳将PCR产物5-10μL经1%的琼脂糖凝胶电泳，在紫外成像仪下观察结果。结果判定阴、阳性对照成立的前提下，在约366bp位置出现扩增带，样品为禽流感H10病毒阳性。规格、贮藏及有效期50份/盒。试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥9个月。（三十四）、合同包1品目号1-34：禽流感H6型抗原禽流感H6病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒用途用于禽流感H6病毒病毒的检测。试剂盒组成名称数量保存禽流感H6病毒RT-PCR Premix1050 μL-20℃Enzyme Mix50 μL-20℃Positive ControL50 μL-20℃Negative ControL50 μL-20℃操作步骤样品RNA提取按照柱式或TRIzoL方法提取样品RNA，作为反应模板。一步法RT- PCR加样体系组份加样量RNA模板3.0 μL禽流感H6病毒 RT-PCR Premix21.0 μLEnzyme Mix1.0 μL总量25.0 μL反应程序42℃30min94℃预变性2min94℃变性30s55℃退火30s35个循环72℃延伸30s72℃延伸5min电泳将PCR产物5-10μL经1%的琼脂糖凝胶电泳，在紫外成像仪下观察结果。结果判定阴、阳性对照成立的前提下，在约421bp位置出现扩增带，样品为禽流感H6病毒阳性。规格、贮藏及有效期50份/盒。试剂盒应-20℃保存，到用户手上有效期应≥9个月。合同包2各品目号的技术参数如下：（一）、合同包2品目号2-1：口蹄疫非结构蛋白NSP抗体目的：本试剂盒用于检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体NSP水平。标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融操作步骤1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照（不加样品、生物素标记的抗-IgG抗体、链霉亲和素-HRP）1孔。2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，37℃温育45分钟。3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。5. 加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl（空白孔除外）。37℃温育30分钟。6. 洗涤：操作同4。7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP（空白孔除外），轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。8. 洗涤：操作同4。9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。结果判定试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值 0.15阴性判定：样品OD值 临界值（CUT OFF）者为口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体（FMDV-VP1-Ab）阴性阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体（FMDV-VP1-Ab）阳性注意事项1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1．试剂盒保存：2-8℃。有效期到用户手上有效期应≥6个月。（二）、合同包2品目号2-2、2-3：犬细小病毒PCR 检测试剂盒使用说明书用途犬细小病毒（CPV）聚合酶链反应（PCR）试验用于检测犬血清和粪便中的CPV，适用于CPV 的检测、诊断和流行病学调查。原理 提取病料DNA作为模板，高温使模板的一条双链DNA变性后形成两条单链，低温使引物与互补的模板形成双链，中温时，在TaqDNA聚合酶作用下，以dNTP为原料，以引物为复制的起点，沿模板合成一条新链。每个循环包括：高温变性、低温退火、适温延伸三个过程。每一次循环使扩增的DNA 片段拷贝数放大一倍。经过35 次循环，使扩增的DNA 片段放大了数百万倍。将扩增产物进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到DNA 片段的扩增带。试剂盒组成名称10头份50头份储藏条件0.2 mL 薄壁PCR 管15 个60 个室温（A 盒）吸附柱和收集管10套50套消化液2.4ml11mlDNA结合液3.6ml16mlDNA洗涤液12ml52mlDNA洗脱液1ml4ml矿物油300ul1.2ml50 倍TAE 电泳缓冲液（50 倍稀释后使用）20 mL100 mL蛋白酶K240ul1.1ml染色液20 μL50 μL阴性对照350 μL1 mL阳性对照350 μL1 mLPCR 反应液200 μL1 mLTaq DNA 聚合酶25 μL120 μL需要自备的物品1．仪器：分析天平、水浴锅、离心机、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL）。2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、1.5ml灭菌离心管、琼脂糖、500ml量筒、500ml錐形瓶、吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）、灭菌双蒸水。注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实验室。2．PCR 整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。3．所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化，8000 rpm 离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立即放回-20 ℃。4．消化液低温时可能出现结晶，请于37℃温育，溶解至澄清透明后使用。5． 染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。较长时间不使用请存放于4℃，以免挥发变干。染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。6．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。7．严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。8．反复冻融试剂将减低检测灵敏度，建议在3 次内用完，请严格按试剂盒说明书操作。样品制备1 样品采集：带检病犬，用棉拭纸取排泄物或分泌物，置于50%甘油生理盐水中或者将粪便取到无菌的小青瓶中：带检病犬，用注射器取血2mL。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融病料。）2 样品处理：每份样品分别处理。2.1 组织样品处理：每份组织分别从三个不同的位置称取样品约1g，用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5ml生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5ml灭菌离心管中。8000rpm离心2min，取上清液100ul于1.5ml灭菌离心管中。再加入200ul消化液和20ul蛋白酶K，振荡混匀后，置56℃水浴中消化1小时。2.2粪便的处理：将装有粪便的小青瓶振荡混匀，转至1.5ml灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100ul于1.5灭菌离心管中，再加入200ul消化液和20ul蛋白酶K,震荡混匀后，置56℃水浴中消化1小时。2.3全血样品处理：待血凝后取血清100ul，加入200ul消化液和20ul蛋白酶K,震荡混匀后，置56℃水浴中消化1小时。2.4 阳性对照处理：取阳性对照100 μL，加入200ul消化液和20ul蛋白酶K,震荡混匀后，置56℃水浴中消化1小时。2.5 阴性对照处理：取阴性对照100 μL加入200ul消化液和20ul蛋白酶K,震荡混匀后，置56℃水浴中消化1小时。操作步骤1 病毒DNA 的提取1.1 从水浴锅中取出样品管，降至室温后，加入300ulDNA结合液，颠倒混匀，将全部液体移入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），室温静置3min，10000rpm离心30S.1.2 弃去收集管中液体，加入500ul DNA洗液，10000 rpm 离心30 s。1.3 重复步骤1.2。1.4 弃去收集管中液体，10000 rpm 空柱离心1 min，以除去残留的DNA 洗涤液。1.5 将吸附柱放入新的1.5 mL 离心管中，向柱中央加入洗脱液(最好56℃预热)50 μL，室温放置2 min，10000 rpm 离心30 s，离心管中液体即为模板DNA。2 RT-PCR 扩增每份总体积20 μL，含16 μL PCR 反应液（用前混匀），2 μl Taq DNA混合酶，2 μL 模板DNA。例如：n 份样品,配制n 1 份，16×（n 1）PCR 反应液，再加入2×（n 1）Taq DNA混合酶，混匀后取18 μL 分装成n 份，分别加入2 μL 模板DNA，加入20 μL 矿物油覆盖（有热盖的PCR 扩增仪不用加），作好标记。在PCR 扩增仪上进行以下循环： 95 ℃ 3 min，循环94℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共35 次；再72℃ 延伸10min.3 电泳称3 g 琼脂糖放于500 mL 锥形瓶中，加入50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液200 mL（取4 mL 50 倍TAE 电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 mL），于微波炉中熔解，再加入10 μL 染色液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR 扩增产物10 μL,点样于琼脂糖凝胶孔中，以110～120 V 电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。结果判定阳性对照出现420 bp 扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出现420bp 扩增带为CDV 阳性，否则为阴性。（三）、合同包2品目号2-4、2-5：犬瘟热病毒RT-PCR 检测试剂盒使用说明书用途犬瘟热病毒（CDV）的聚合酶链反应（PCR）试验用于检测犬血液、分泌物和排泄物中的CDV，适用于CDV 的检测、诊断和流行病学调查。原理 利用离心柱内硅基质膜提取RNA，在反转录酶的作用下，以RNA为模版，以引物为起点合成与RNA模版互补的cDNA链。在TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异DNA片段的拷贝数放大一倍。经过35 次循环，最终使扩增的DNA 片段放大了数百万倍。将扩增DNA片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到DNA 片段的扩增带。试剂盒组成名称10头份50头份储藏条件0.2 mL 薄壁PCR 管15 个60 个室温（A 盒）吸附柱和收集管10套50套裂解液6ml30ml洗液12ml60ml洗脱液1ml10ml矿物油300ul1.2ml50 倍TAE 电泳缓冲液（50 倍稀释后使用）20 mL100 mL染色液20 μL50 μL阴性对照350 μL1 mL-20 ℃（B盒）阳性对照350 μL1 mLPCR 反应液200 μL1 mL酶混合液15 μL65 μL需要自备的物品1．仪器：分析天平、离心机、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL）。2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、500ml量筒、500ml錐形瓶、经焦碳酸二乙酯（DEPC）水处理的灭菌1.5ml离心管和吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）、灭菌双蒸水。注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实验室。2．PCR 整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。3．所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化，8000 rpm 离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立即放回-20 ℃。4．在RNA提取过程中，避免RNA酶污染，尽量缩短操作时间。5． 染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。较长时间不使用请存放于4℃，以免挥发变干。染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。6．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。7．严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。8．反复冻融试剂将减低检测灵敏度，建议在3 次内用完，请严格按试剂盒说明书操作。样品制备1 样品采集：带检病犬，用棉拭纸取排泄物或分泌物，置于50%甘油生理盐水中或者将粪便取到无菌的小青瓶中：带检病犬，用注射器取血2mL。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融病料。）2 样品处理：每份样品分别处理。2.1 抗凝血样品处理：取100ul，置1.5ml灭菌离心管中。2.2排泄物或分泌物处理：将排泄物或分泌物振荡混匀或取粪便约0.05g到离心管中加入1.5ml生理盐水振荡混匀，8000rpm离心2min，取上清液100ul于1.5ml灭菌离心管中。2.3 阳性对照处理：取阳性对照100 μL，置1.5ml灭菌离心管中。。2.4 阴性对照处理：取阴性对照100 μL，置1.5ml灭菌离心管中。操作步骤1 病毒DNA 的提取1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液600ul，充分颠倒混匀，静置3-5 min。1.2将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），13000rpm离心30S。1.3 弃去收集管中液体，加入600 μL洗液，13000 rpm 离心30 s。1.4 重复步骤1.3。1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm 空柱离心2 min，以除去残留的DNA 洗涤液。1.6 将吸附柱放入新的1.5 mL 离心管中，向柱中央加入洗脱液50 μL，室温放置1 min，13000 rpm 离心30 s，离心管中液体即为模板DNA。2 RT-PCR 扩增每份总体积20 μL，含16.8 μL PCR 反应液（用前混匀），1.2 μL 酶混合液，2 μL 模板DNA。例如：n 份样品（n10）,配制n 1 份，16.8×（n 1）RT-PCR 反应液，再加入1.2×（n 1）酶混合液混匀，取18 μL 分装成n 份，分别加入2 μL 模板DNA，加入20 μL 矿物油覆盖（有热盖的PCR 扩增仪不用加），作好标记。在PCR 扩增仪上进行以下循环：42 ℃ 45 min；循环95 ℃ 3 min，扩增条件为95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35 次循环；72℃ 延伸10min.再72 ℃延伸7 min。3 电泳称3 g 琼脂糖放于500 mL 锥形瓶中，加入50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液200 mL（取4 mL 50 倍TAE 电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 mL），于微波炉中熔解，再加入10 μL 染色液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR 扩增产物10 μL,点样于琼脂糖凝胶孔中，以110～120 V 电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。结果判定阳性对照出现285 bp 扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出现285bp 扩增带为CDV 阳性，否则为阴性。（四）、合同包2品目号2-6到2-11，,2-18,2-19：CSFV/FMD/HPPRRS/PRRS病毒RT-PCR 检测试剂盒使用说明书用途 CSFV/FMD/HPPRRS/PRRS的聚合酶链反应（PCR）试验适用于CSFV/FMD/HPPRRS/PRRS的检测、诊断和流行病学调查。原理 利用离心柱内硅基质膜提取RNA，在反转录酶的作用下，以RNA为模版，以引物为起点合成与RNA模版互补的cDNA链。在TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异DNA片段的拷贝数放大一倍。经过35 次循环，最终使扩增的DNA 片段放大了数百万倍。将扩增DNA片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到DNA 片段的扩增带。试剂盒组成名称10头份50头份储藏条件0.2 mL 薄壁PCR 管15 个60 个室温（A 盒）吸附柱和收集管10套50套裂解液6ml30ml洗液12ml60ml洗脱液1ml10ml矿物油300ul1.2ml50 倍TAE 电泳缓冲液（50 倍稀释后使用）20 mL100 mL染色液20 μL50 μL阴性对照350 μL1 mL-20 ℃（B盒）阳性对照350 μL1 mLPCR 反应液200 μL1 mL酶混合液15 μL65 μL需要自备的物品1．仪器：分析天平、离心机、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL）。2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、500ml量筒、500ml錐形瓶、经焦碳酸二乙酯（DEPC）水处理的灭菌1.5ml离心管和吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）、灭菌双蒸水。注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实验室。2．PCR 整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。3．所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化，8000 rpm 离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立即放回-20 ℃。4．在RNA提取过程中，避免RNA酶污染，尽量缩短操作时间。5． 染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。较长时间不使用请存放于4℃，以免挥发变干。染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。6．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。7．严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。8．反复冻融试剂将减低检测灵敏度，建议在3 次内用完，请严格按试剂盒说明书操作。样品制备1 样品采集：带检病犬，用棉拭纸取排泄物或分泌物，置于50%甘油生理盐水中或者将粪便取到无菌的小青瓶中：带检病犬，用注射器取血2mL。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融病料。）2 样品处理：每份样品分别处理。2.1 抗凝血样品处理：取100ul，置1.5ml灭菌离心管中。2.2排泄物或分泌物处理：将排泄物或分泌物振荡混匀或取粪便约0.05g到离心管中加入1.5ml生理盐水振荡混匀，8000rpm离心2min，取上清液100ul于1.5ml灭菌离心管中。2.3 阳性对照处理：取阳性对照100 μL，置1.5ml灭菌离心管中。。2.4 阴性对照处理：取阴性对照100 μL，置1.5ml灭菌离心管中。操作步骤1 病毒DNA 的提取1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液600ul，充分颠倒混匀，静置3-5 min。1.2将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），13000rpm离心30S.1.3 弃去收集管中液体，加入600 μL洗液，13000 rpm 离心30 s。1.4 重复步骤1.3。1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm 空柱离心2 min，以除去残留的DNA 洗涤液。1.6 将吸附柱放入新的1.5 mL 离心管中，向柱中央加入洗脱液50 μL，室温放置1 min，13000 rpm 离心30 s，离心管中液体即为模板DNA。2 RT-PCR 扩增每份总体积20 μL，含16.8 μL PCR 反应液（用前混匀），1.2 μL 酶混合液，2 μL 模板DNA。例如：n 份样品（n10）,配制n 1 份，16.8×（n 1）RT-PCR 反应液，再加入1.2×（n 1）酶混合液混匀，取18 μL 分装成n 份，分别加入2 μL 模板DNA，加入20 μL 矿物油覆盖（有热盖的PCR 扩增仪不用加），作好标记。在PCR 扩增仪上进行以下循环：42 ℃ 45 min；循环95 ℃ 3 min，扩增条件为95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35 次循环；72℃ 延伸10min.再72 ℃延伸7 min。3 电泳称3 g 琼脂糖放于500 mL 锥形瓶中，加入50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液200 mL（取4 mL 50 倍TAE 电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 mL），于微波炉中熔解，再加入10 μL 染色液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR 扩增产物10 μL,点样于琼脂糖凝胶孔中，以110～120 V 电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。结果判定阳性对照出现285/369/579/211bp 扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出现285/369/579/211bp 扩增带为CSFV/FMD/HPPRRS/PRRS 阳性，否则为阴性。（五）、合同包2品目号2-12到2-17：PRV/PPV/PCV/PCV2病毒PCR 检测试剂盒使用说明书用途PRV/PPV/PCV/PCV2的聚合酶链反应（PCR）试验适用于PRV/PPV/PCV/PCV2的检测、诊断和流行病学调查。试剂盒组成名称10头份50头份储藏条件0.2 mL 薄壁PCR 管15 个60 个室温（A 盒）吸附柱和收集管10套50套裂解液6ml30ml洗液12ml60ml洗脱液1ml10ml矿物油300ul1.2ml50 倍TAE 电泳缓冲液（50 倍稀释后使用）20 mL100 mL染色液20 μL50 μL阴性对照350 μL1 mL-20 ℃（B盒）阳性对照350 μL1 mLPCR 反应液200 μL1 mL酶混合液15 μL65 μL需要自备的物品1．仪器：分析天平、离心机、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL）。2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、500ml量筒、500ml錐形瓶、经焦碳酸二乙酯（DEPC）水处理的灭菌1.5ml离心管和吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）、灭菌双蒸水。注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实验室。2．PCR 整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。3．所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化，8000 rpm 离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立即放回-20 ℃。4．在RNA提取过程中，避免RNA酶污染，尽量缩短操作时间。5． 染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。较长时间不使用请存放于4℃，以免挥发变干。染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。6．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。7．严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。8．反复冻融试剂将减低检测灵敏度，建议在3 次内用完，请严格按试剂盒说明书操作。样品制备1 样品采集：带检病犬，用棉拭纸取排泄物或分泌物，置于50%甘油生理盐水中或者将粪便取到无菌的小青瓶中：带检病犬，用注射器取血2mL。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融病料。）2 样品处理：每份样品分别处理。2.1 抗凝血样品处理：取100ul，置1.5ml灭菌离心管中。2.2排泄物或分泌物处理：将排泄物或分泌物振荡混匀或取粪便约0.05g到离心管中加入1.5ml生理盐水振荡混匀，8000rpm离心2min，取上清液100ul于1.5ml灭菌离心管中。2.3 阳性对照处理：取阳性对照100 μL，置1.5ml灭菌离心管中。。2.4 阴性对照处理：取阴性对照100 μL，置1.5ml灭菌离心管中。操作步骤1 病毒DNA 的提取1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液600ul，充分颠倒混匀，静置3-5 min。1.2将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），13000rpm离心30S.1.3 弃去收集管中液体，加入600 μL洗液，13000 rpm 离心30 s。1.4 重复步骤1.3。1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm 空柱离心2 min，以除去残留的DNA 洗涤液。1.6 将吸附柱放入新的1.5 mL 离心管中，向柱中央加入洗脱液50 μL，室温放置1 min，13000 rpm 离心30 s，离心管中液体即为模板DNA。2 RT-PCR 扩增每份总体积20 μL，含16.8 μL PCR 反应液（用前混匀），1.2 μL 酶混合液，2 μL 模板DNA。例如：n 份样品（n10）,配制n 1 份，16.8×（n 1）RT-PCR 反应液，再加入1.2×（n 1）酶混合液混匀，取18 μL 分装成n 份，分别加入2 μL 模板DNA，加入20 μL 矿物油覆盖（有热盖的PCR 扩增仪不用加），作好标记。在PCR 扩增仪上进行以下循环：42 ℃ 45 min；循环95 ℃ 3 min，扩增条件为95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35 次循环；72℃ 延伸10min.再72 ℃延伸7 min。3 电泳称3 g 琼脂糖放于500 mL 锥形瓶中，加入50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液200 mL（取4 mL 50 倍TAE 电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 mL），于微波炉中熔解，再加入10 μL 染色液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR 扩增产物10 μL,点样于琼脂糖凝胶孔中，以110～120 V 电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。结果判定阳性对照出现532/477/198/352bp 扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出现532/477/198/352bp 扩增带为PRV/PPV/PCV/PCV2阳性，否则为阴性。（六）、合同包2品目号2-20至2-28：禽流感H5/H7/H9/ND病毒（荧光）RT-PCR 检测试剂盒使用说明书用途禽流感H5/H7/H9/ND的（荧光）聚合酶链反应（PCR）试验用于适用于禽流感H5/H7/H9/ND的检测、诊断和流行病学调查。原理 利用离心柱内硅基质膜提取RNA，在反转录酶的作用下，以RNA为模版，以引物为起点合成与RNA模版互补的cDNA链。在TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异DNA片段的拷贝数放大一倍。经过35 次循环，最终使扩增的DNA 片段放大了数百万倍。将扩增DNA片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到DNA 片段的扩增带。试剂盒组成名称10头份50头份储藏条件0.2 mL 薄壁PCR 管15 个60 个室温（A 盒）吸附柱和收集管10套50套裂解液6ml30ml洗液12ml60ml洗脱液1ml10ml矿物油300ul1.2ml50 倍TAE 电泳缓冲液（50 倍稀释后使用）20 mL100 mL染色液20 μL50 μL阴性对照350 μL1 mL-20 ℃（B盒）阳性对照350 μL1 mLPCR 反应液200 μL1 mL酶混合液15 μL65 μL需要自备的物品1．仪器：分析天平、离心机、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL）。2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、500ml量筒、500ml錐形瓶、经焦碳酸二乙酯（DEPC）水处理的灭菌1.5ml离心管和吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）、灭菌双蒸水。注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实验室。2．PCR 整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。3．所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化，8000 rpm 离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立即放回-20 ℃。4．在RNA提取过程中，避免RNA酶污染，尽量缩短操作时间。5． 染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。较长时间不使用请存放于4℃，以免挥发变干。染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。6．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。7．严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。8．反复冻融试剂将减低检测灵敏度，建议在3 次内用完，请严格按试剂盒说明书操作。样品制备1 样品采集：带检病犬，用棉拭纸取排泄物或分泌物，置于50%甘油生理盐水中或者将粪便取到无菌的小青瓶中：带检病犬，用注射器取血2mL。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融病料。）2 样品处理：每份样品分别处理。2.1 抗凝血样品处理：取100ul，置1.5ml灭菌离心管中。2.2排泄物或分泌物处理：将排泄物或分泌物振荡混匀或取粪便约0.05g到离心管中加入1.5ml生理盐水振荡混匀，8000rpm离心2min，取上清液100ul于1.5ml灭菌离心管中。2.3 阳性对照处理：取阳性对照100 μL，置1.5ml灭菌离心管中。。2.4 阴性对照处理：取阴性对照100 μL，置1.5ml灭菌离心管中。操作步骤1 病毒RNA 的提取1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液600ul，充分颠倒混匀，静置3-5 min。1.2将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），13000rpm离心30S.1.3 弃去收集管中液体，加入600 μL洗液，13000 rpm 离心30 s。1.4 重复步骤1.3。1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm 空柱离心2 min，以除去残留的DNA 洗涤液。1.6 将吸附柱放入新的1.5 mL 离心管中，向柱中央加入洗脱液50 μL，室温放置1 min，13000 rpm 离心30 s，离心管中液体即为模板DNA。2 RT-PCR 扩增/荧光RT-PCR扩增每份总体积20 μL，含16.8 μL PCR 反应液（用前混匀），1.2 μL 酶混合液，2 μL 模板DNA。例如：n 份样品（n10）,配制n 1 份，16.8×（n 1）RT-PCR 反应液，再加入1.2×（n 1）酶混合液混匀，取18 μL 分装成n 份，分别加入2 μL 模板DNA，加入20 μL 矿物油覆盖（有热盖的PCR 扩增仪不用加），作好标记。在PCR 扩增仪上进行以下循环：42 ℃ 45 min；循环95 ℃ 3 min，扩增条件为95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35 次循环；72℃ 延伸10min.再72 ℃延伸7 min。（荧光）循环条件设置114230:00None 21923:00None359210None4530None721:00None4409210None6030收集荧光5 1400None*仪器检测通道选择FAM通道。3 电泳/荧光Ct判定称3 g 琼脂糖放于500 mL 锥形瓶中，加入50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液200 mL（取4 mL 50 倍TAE 电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 mL），于微波炉中熔解，再加入10 μL 染色液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR 扩增产物10 μL,点样于琼脂糖凝胶孔中，以110～120 V 电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。结果判定阳性对照出现285/366/472/156bp 扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出现285/366/472/156bp 扩增带为禽流感H5/H7/H9/ND阳性，否则为阴性。阴性对照的检测结果为阴性。阳性对照的Ct值应≤28.0。否则，此次实验视为无效。Ct值无数值的样本为阴性样本。Ct值≤30.0的样本为阳性。Ct值大于30.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。（七）、合同包2品目号2-29：狂犬病抗体ELisa检测试剂盒规格96头份/盒. 用途应用间接酶联免疫法(ELISA)检测犬血清或血浆中抗狂犬病毒 IgG 抗体，适用于犬狂犬病毒的免疫效果监测和抗体水平调查。 试剂盒组成预包被狂犬病毒抗原的微孔板：96孔；狂犬病毒IgG 酶标记物：1瓶；狂犬病毒IgG 阳性对照(直接使用)：1支；狂犬病毒IgG临界对照(直接使用)：1支；狂犬病毒IgG阴性对照(直接使用)：1支；显色液A：1瓶；显色液B：1瓶；终止液：1瓶；浓缩洗涤液(10倍)：1瓶；样品稀释液：2瓶；封板膜：2片；密封袋：1个；使用说明书：1份；记录纸：1份。所需仪器 450nm波长的酶标仪；(10～100)μL 移液器；37℃恒温箱或水浴箱。样本要求分离样品：将采集到的待检犬血液样品离心，分离出待检犬血清或血浆。 使用无菌犬血清或血浆进行检测，应尽量避免使用染菌、溶血和高血脂的样品；室温保存样品不要超过 8 小时，若实验在 8 小时以后进行，需将样品保存在(2～10)℃，如保存超过1周则应保存在-20℃并避免反复冻融。 操作步骤1)试剂盒放置室温平衡(20～30)min。取出浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水作10倍稀释备用。 2)稀释样品：将已分离好的犬血清或血浆用样品稀释液做1:10稀释，即取50μL血清。或血浆加入到0.5mL样品稀释液中，并充分混匀。3)加样：取所需量的预包被微孔板条固定于板架上，依次加入稀释好的样品，100μL/孔，然后将阳性、阴性对照各加1孔，临界对照加3孔，100μL/孔，另留一孔不加样品作空白对照孔，在记录纸上记录各样品和参考品的次序或位置。剩余的板条放犬狂犬病毒IgG抗体检测试剂盒(定性)使用说明书入密封袋中保存。4)孵育：加样完成后，置37℃恒温箱或水浴箱(用封板膜覆盖板条，以避免水珠滴入微孔)中孵育30min。5)洗板：甩净孔中液体，拍干，用稀释好的洗涤液加满每孔，停留1min后甩净、拍干，反复洗板3次。 6)加酶：除空白对照外，其余各孔垂直滴加酶标记物50μL(1滴)，置37℃孵育30min。7)显色：重复步骤5洗板3次，拍干后每孔(含空白孔)垂直滴加显色液A、B各50μL(1 滴)，置37℃避光显色10min。 8)终止：每孔(含空白孔)立即加入终止液50μL(1滴)，混匀后以空白孔调零，用酶标仪450nm波长测定A/OD值。 结果判定在酶标仪上，以空白孔调零，450nm波长测定A/OD值。阴性对照值应≤0.10，临界对照A/OD值应在0.15～0.40之间，证明实验成立。 如样品孔A/OD值≥临界对照A/OD值的平均值判为阳性，达到抗体保护水平；反之为阴性。贮藏要求2℃～8℃。有 效 期到用户手上保质期大于等于6个月。（八）、合同包2品目号2-30至2-32：布病试管凝集诊断试剂 【有效期】到用户手上有效期应≥6个月。（九）、合同包2品目号2-33：布病病原学诊断试剂盒用途：检测布鲁氏菌病细菌核酸片段。原理利用离心柱内惰性大分子膜提取病料DNA 作为模板，高温使模板的一条双链DNA 变性后形成两条单链，低温使引物与互补的模板形成双链，中温时，在TaqDNA 聚合酶作用下，以dNTP 为原料，以引物为复制的起点，沿模板合成一条新链。每个循环包括：高温变性、低温退火、适温延伸三个过程。每一次循环使扩增的DNA 片段拷贝数放大一倍。经过35 次循环，使扩增的DNA 片段放大了数百万倍。将扩增产物进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到DNA 片段的扩增带。样品处理：每份样品分别处理。2.1 组织样品处理：每份组织分别从三个不同的位置称取样品约1g，用手术剪剪碎混匀后取0.05 g 于研磨器中研磨，加入1.5 mL 生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5 mL 灭菌离心管中，8000 rpm 离心2 min，取上清液100 μL 于1.5 mL 灭菌离心管中，再加入200 μL 消化液和20 μL 蛋白酶K，振荡混匀后，置56 ℃水浴中消化1 小时。2.2 全血样品处理：待血凝后取血清100 μL，加入200 μL 消化液和20 μL 蛋白酶K，振荡混匀后，置56 ℃水浴中消化1 小时。2.3 阳性对照处理：取阳性对照100 μL，加入200 μL 消化液和20 μL 蛋白酶K，振荡混匀后，置56 ℃水浴中消化1 小时。2.4 阴性对照处理：取阴性对照100 μL，加入200 μL 消化液和20 μL 蛋白酶K，振荡混匀后，置56 ℃水浴中消化1 小时。操作步骤1 病毒DNA 的提取1.1 从水浴锅中取出样品管，降至室温后，加入300 μL DNA 结合液，颠倒混匀，将全部液体移入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），室温静置3 min，10000 rpm 离心30 s。1.2 弃去收集管中液体，加入500 μL DNA 洗涤液，10000 rpm 离心30 s。1.3 重复步骤1.2。1.4 弃去收集管中液体，10000 rpm 空柱离心1 min，以除去残留的DNA 洗涤液。1.5 将吸附柱放入新的1.5 mL 离心管中，向柱中央加入DNA 洗脱液（最好56 ℃预热）50 μL，室温放置2min，10000 rpm 离心30 s，离心管中液体即为模板DNA。2 PCR 扩增每份总体积20 μL，含16 μL PCR 反应液（用前混匀），2 μL Taq DNA 聚合酶，2 μL 模板DNA。例如：n 份样品，配制n 1 份，16×（n 1）PCR 反应液，再加入2×（n 1）Taq DNA 聚合酶，混匀后取18 μL 分装成n 份，分别加入2μL 模板DNA，加入20 μL 矿物油覆盖（有热盖的PCR 扩增仪不用加），作好标记。在PCR 扩增仪上进行以下程序：94 ℃ 3 min；循环94 ℃ 30 s，62 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，共35 次；再72 ℃延伸10 min。3 电泳称2 g 琼脂糖放于500 mL 锥形瓶中，加入50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液200 mL（取4 mL 50 倍TAE电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 mL），于微波炉中熔解，再加入10 μL 染色液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR 扩增产物10 μL 混合2 μL 上样缓冲液，点样于琼脂糖凝胶孔中，以110～120 V 电压于50 倍稀释的TAE 电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。（十）、合同包2品目号2-34至2-41：H5/H7/H9抗体检测试剂盒 主要成分抗原为哈尔滨灭活的AI病毒，血凝效价≥7Log2。阳性血清为SPF鸡感染AI病毒制备的高免血清，HI效价≥7Log2。阴性血清为SPF鸡血清。作用与用途用于HI试验检测H5/H7/H9抗体。技术标准H5/H7/H9抗体检测应符合GB/T18936-2003《高致病性禽流感诊断技术》的技术标准。材料96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器(配有吸头)、加样槽、吸管、烧杯等。pH值7.2 0.01moL/L PBS：1)配制25倍PB称量2.74g Na2HPO4和0.79g NaH2PO4H2O，加蒸馏水至100mL；2)配制1倍PBS量取40mL 25倍PB，加入8.5g NaCL，加蒸馏水至1000mL；3)用NaOH或HCL调pH值至7.2；4)69Kpa 15min高压灭菌或用微孔滤膜过滤除菌；5)PBS一经使用，于2℃～8℃保存不超过3周。阿氏(ALsevers)液：称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa 15min高压灭菌，2～8℃保存备用。1%鸡红细胞悬液：采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用pH值7.2 0.01moL/L PBS液洗涤3次，每次均以3000rpm离心5min，洗涤后用PBS配成1%(V/V)红细胞悬液，2～8℃保存备用。抗原溶解：冻干的抗原和血清均按瓶签上规格标注的量，用PBS溶解。操作过程血凝(HA)试验1)在V型微量反应板中，每孔加0.025mL PBS。2)第L孔加0.025mL抗原，反复抽打3～5次混匀。3)从第1孔吸取0.025mL抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025mL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃去。4)每孔加0.025mL PBS。5)每孔加入0.025mL 1%(V/V)鸡红细胞悬液。6)将反应板在振荡器上震荡1～2min或轻扣反应板混合反应物，在室温(20～25℃)下静置20～30min或2～8℃ 45～60min。在对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。7)结果判定将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数为血凝效价。血凝抑制(HI)试验1)根据HA试验测定的效价，计算配制4个血凝单位(4HAU)抗原。HA效价除以4即为含4HAU抗原的稀释倍数。例如，HA效价为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64(256除以4)。2)第1～11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。3)第1孔加入0.025mL血清，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。4)第1～11孔均加入0.025mL的4HAU抗原，在室温(20～25)℃下静置30min或2～8℃ 50min。5)每孔加入0.025mL 1%(V/V)的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温(20～25)℃下静置20～30min或2℃～8℃ 45～60min，对照红细胞将呈明显钮扣状沉于孔底。结果判定以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。当阳性对照血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性对照血清效价不高于21og2时，试验方可成立。被检血清HI效价≤31og2判为阴性；＝41og2判为可疑(可疑样品应重检，重检效价≥41og2判为阳性，≤31og2判为阴性)；≥51og2判为阳性。规格与包装 抗原为2mL/瓶，10瓶/盒；阴、阳性血清为1mL/瓶，10瓶/盒。贮藏与有效期-20℃以下保存，到用户手上有效期≥20个月。（十一）、合同包2品目号2-42至2-43：ND抗体检测试剂盒主要成分抗原为易邦灭活的AI病毒，血凝效价≥7Log2。阳性血清为SPF鸡感染ND病毒制备的高免血清，HI效价≥7Log2。阴性血清为SPF鸡血清。作用与用途用于HI试验检测ND抗体。技术标准ND抗体检测应符合GB/T 16550-2008《新城疫诊断技术》的技术标准。材料96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器(配有吸头)、加样槽、吸管、烧杯等。pH值7.2 0.01moL/L PBS：1)配制25倍PB称量2.74g Na2HPO4和0.79g NaH2PO4。H2O，加蒸馏水至100mL；2)配制1倍PBS量取40mL 25倍PB，加入8.5g NaCL，加蒸馏水至1000mL；3)用NaOH或HCL调pH值至7.2；4)69Kpa 15min高压灭菌或用微孔滤膜过滤除菌；5)PBS一经使用，于2℃～8℃保存不超过3周。阿氏(ALsevers)液：称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa 15min高压灭菌，2～8℃保存备用。1%鸡红细胞悬液：采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用pH值7.2 0.01moL/L PBS液洗涤3次，每次均以3000rpm离心5min，洗涤后用PBS配成1%(V/V)红细胞悬液，2～8℃保存备用。抗原溶解：冻干的抗原和血清均按瓶签上规格标注的量，用PBS溶解。操作过程血凝(HA)试验1)在V型微量反应板中，每孔加0.025mL PBS。2)第L孔加0.025mL抗原，反复抽打3～5次混匀。3)从第1孔吸取0.025mL抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025mL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃去。4)每孔加0.025mL PBS。5)每孔加入0.025mL 1%(V/V)鸡红细胞悬液。6)将反应板在振荡器上震荡1～2min或轻扣反应板混合反应物，在室温(20～25℃)下静置20～30min或2～8℃ 45～60min。在对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。7)结果判定：将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌(100%凝集)的最高稀释倍数为血凝效价。血凝抑制(HI)试验1)根据HA试验测定的效价，计算配制4个血凝单位(4HAU)抗原。HA效价除以4即为含4HAU抗原的稀释倍数。例如，HA效价为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64(256除以4)。2)第1～11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。3)第1孔加入0.025mL血清，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。4)第1～11孔均加入0.025mL的4HAU抗原，在室温(20～25)℃下静置30min或2～8℃ 50min。5)每孔加入0.025mL 1%(V/V)的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温(20～25)℃下静置20～30min或2℃～8℃ 45～60min，对照红细胞将呈明显钮扣状沉于孔底。结果判定以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。当阳性对照血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性对照血清效价不高于21og2时，试验方可成立。被检血清HI效价≤31og2判为阴性；＝41og2判为可疑(可疑样品应重检，重检效价≥41og2判为阳性，≤31og2判为阴性)；≥51og2判为阳性。规格与包装 抗原为2mL/瓶，10瓶/盒；阴、阳性血清为1mL/瓶，10瓶/盒。贮藏与有效期-20℃以下保存，到用户手上有效期≥20个月。（十二）、合同包2品目号2-44至2-47：口蹄疫O/A/AisaI/C型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒使用说明书用途用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫O/A/AisaI/C型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体检测。器材准备1. 移液器： 5-50μl移液器、0.2-10 μl移液器、50-200 μl移液器、50-300 μl 12道移液器各一把；2. 移液枪尖（若干）；3. 抗原抗体反应板：微量血凝板(U型、V型均可)若干块，本试剂盒配备两块，用于被检血清的稀释和抗原抗体反应；4. 水质要求： 无离子水或蒸馏水均可。试剂准备1. 包被缓冲液（pH9.6）： 将本试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊1粒小心打开，将胶囊内粉末倒入100mL无离子水中溶解即可。4℃存放，1月内有效；2. 磷酸盐-吐温缓冲液（PBST）： 使用前，将本试剂盒配备的25倍PBST浓缩液用无离子水或蒸馏水稀释成1倍PBST（1份浓缩液加入24份水进行稀释）；3. 底物溶液： 取1片柠檬酸-磷酸盐片剂溶于100 mL无离子水中，溶化后，取50 mL本溶液，再加1片邻苯二胺（OPD）片剂，充分溶解，分装，避光-20℃保存。操作步骤1. 用包被缓冲液稀释口蹄疫O/A/AisaI/C型兔抗血清至工作浓度，在酶标板上加50μl/孔，振荡，封板或置湿盒内，室温过夜。2．抗原抗体（阴阳性对照血清及待检血清）反应： 根据不同的需要，选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。图1为抗体滴度测定（定量）检测10份样品布局图；图2为抗体滴度测定（定量）检测20份样品布局图。稀释血清：以图1为例操作，在96孔血清/病毒抗原反应板上，以50μl /孔的量用PBST两倍连续稀释被检血清，从1:4至1:512。同时稀释阳性对照血清，从1:8～1:1024；稀释阴性对照血清，从1:2～1:4；将病毒抗原用PBST稀释至工作浓度，以50μl /孔的量加入被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，4孔病毒抗原对照孔仅加入100μl /孔稀释至工作浓度的病毒抗原，振荡，2～8℃过夜。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，变为1:8～1:1024。图196孔酶标板检测10份样品布局图123456789101112AS1 1:8S2S3S4S5S6S7S8S9S10 1:16- 1:4B1:161:321:8C1:321:64D1:641:128E1:1281:256病毒抗原对照F1:2561:512G1:5121:1024H1:10241:2048注：检测猪血清样品时，稀释度变为从1:4开始。图296孔酶标板检测20份样品布局图123456789101112AS1 1:16S2S3S4S5S6S7S8S9S10 1:16- 1:4B1:321:321:8C1:641:64D1:1281:128ES11 1:16S12S13S14S15S16S17S18S19S201:256病毒抗原对照F1:321:512G1:641:1024H1:1281:2048注：检测猪血清样品时，稀释度变为从1:8开始3. 用PBST连续洗酶标板5次，在洗水纸上甩干，再将抗原抗体混合物从抗原抗体反应板上按次序转移至酶标板上的相对应孔，50μl/孔，封板，37℃ 温育60分钟。4. 同上洗板5次，甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释口蹄疫O型病毒豚鼠抗血清至工作浓度（1:1000），加50μl/孔，封板，37℃温育60分钟。5. 同上洗板5次，甩干。用PBST稀释兔抗豚鼠血清?Ig G-辣根过氧化物酶结合物至工作浓度（1:500），加50μl/孔，封板，37℃温育60分钟。6. 同上洗板5次，加50μl/孔底物溶液（底物溶液务必要加双氧水，（H2O2），每1ml加10μl本试剂盒配备的3%双氧水），37℃温育15分钟。每孔再加50 μl 终止液终止反应，读取D492nm值）。结果判定1.试验认可标准每块板设4孔病毒抗原对照，病毒抗原对照不加任何血清，直接用PBST稀释至工作浓度，与血清/病毒抗原复合物同步加入酶标板孔，50ul/孔。病毒抗原对照D492nm值应在1.5±0.5范围内。阳性对照抗体效价应在1∶1024±1滴度以内，阴性对照血清抗体效价应1:8。2.血清抗体效价的判定抗原对照是4孔，弃去最高和最低D492nm值，计算剩余2孔的平均D492nm值，再除以2，即50%对照值。该值即为临界值，表示阻断50％反应的对照D492nm值。以病毒抗原对照平均D492nm值的50%为临界值，被检血清D492nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于等于临界值的孔为阳性孔。某份血清系列稀释中，阳性孔的最高稀释倍数为被检血清的抗体效价。若临界值处于两个稀释孔D492nm值之间，抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值，如处于1:64（反对数值为1.8）与1:128（反对数值为2.1）之间，则判定该份血清的抗体效价为1:90（反对数值为1.95）。定性检测中，两个重复孔只要有一孔为阳性孔，则抗体滴度判为1:128，两孔均为阳性孔，则判为抗体滴度1:128。3.结果判定抗体效价大于或等于1:128判为口蹄疫O型抗体阳性；1:64～1:128时，判为可疑；小于或者等于1:64，判定为阴性。可疑血清样品，可以重测，重测抗体效价大于或等于1:128，判为阳性，小于1:128判为阴性。4.ELISA抗体效价与免疫动物攻毒保护的关系牛、羊：抗体滴度≥1:128，99%以上保护；≤1:16不保护；1:22～90，50%保护。猪：≥1:64，99%以上保护；＜1:4 不保护；1:4～45，50%保护。 抗体效价计算对照表抗体效价Log10（效价）对照计算抗体效价Log10（效价）对照计算抗体效价Log10（效价）对照计算1:40.61:321.51:2562.41:60.751:451.651:3602.551:80.91:641.81:5122.71:111.051:901.951:7202.851:161.21:1282.11:102431:221.351:1802.251:14403.15注意事项1. 为使您的检测获得正确结果，请您在检测前仔细阅读本说明书；2. 本试剂盒配备的25倍PBST浓缩液在低温放置下，可能有无机盐结晶，用前微热溶化。25倍稀释后，如pH发生变化，务必用NaOH或稀HCl溶液调pH值至7.4；3. 底物溶液使用前避光溶化，临用时每1 mL上述溶液加10μl 本试剂盒配备的3%的双氧水（H2O2）。底物溶液加双氧水前为无色透明液体，如出现变色，弃去不用；4. 抗原抗体反应板可重复使用，实验结束后，用水冲洗干净，然后用无离子水沸水浴30秒，晾干，待用。贮藏与有效期口蹄疫O/A/AisaI/C型病毒抗原：-20℃以下保存；其余试剂盒组分放置2～8℃保存，有效期为6个月。规格96孔/块，10块酶标板/盒。（十三）、合同包2品目号2-48：口蹄疫抗体正向血凝一、原理用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验（IHA）。抗原与其对应的抗体相遇，在一定条件下会形成抗原复合物，但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。若将抗原吸附（致敏）在经过特殊处理的红细胞表面，只需少量抗原就能大大提高抗原和抗体的反应灵敏性。这种经过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇，红细胞便出现清晰可见的凝集现象。二、适用范围主要用于检测O型口蹄疫免疫动物血清抗体效价。三、试验器材和试剂3.1 96孔110°V型医用血凝板，与血凝板大小相同的玻板3.2 微量移液器（50μL 25μL）取液塑咀3.3 微量振荡器3.4 O型口蹄疫血凝抗原3.5 O型口蹄疫阴性对照血清3.6 O型口蹄疫阳性对照血清3.7 稀释液3.8 待检血清（每头约0.5ml血清即可）56℃水浴灭活30分钟四、试验方法4.1 加稀释液在血凝板上1-6排的1-9孔；第7排的1-4孔第6-7孔；第8排的1-12孔各加稀释液50μL。4.2 稀释待检血清取1号待检血清50μL加入第1排第1孔，并将塑咀插入孔底，右手拇指轻压弹簧1-2次混匀（避免产生过多的气泡），从该孔取出50μL移入第2孔，混匀后取出50μL移入第3 孔……直至第9孔混匀后取出50μL丢弃。此时第1排1-9孔待检血清的稀释度（稀释倍数）依次为：1:2⑴、1:4⑵、1:8⑶、1:16⑷、1:32⑸、1:64⑹、1:128⑺、1:256⑻、1:512⑼。取2号待检血清加入第2排；取3号待检血清加入第3排……均按上法稀释，注意！每取一份血清时，必须更换塑咀一个。4.3 稀释阴性对照血清在血凝板的第7排第1孔加阴性血清50μL，对倍稀释至第4孔，混匀后从该孔取出50μL丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为1:2⑴、1:4⑵、1:8⑶、1:16⑷。第6-7孔为稀释液对照。4.4 稀释阳性对照血清在血凝板的第8排第1孔加阳性血清50μL，对倍数稀释至第12孔，混匀后从该孔取出50μL丢弃。此时阳性血清的稀释倍数依次为1：2-1：4096。4.5 加血凝抗原被检血清各孔、阴性对照血清各孔、阳性对照血清各孔、稀释液对照孔均各加O型血凝抗原（充分摇匀，瓶底应无血球沉淀）25μL。4.6 振荡混匀将血凝板置于微量振荡器上1-2分钟，如无振荡器，用手轻拍混匀亦可，然后将血凝板放在白纸上观察各孔红血球是否混匀，不出现血球沉淀为合格。盖上玻板，室温下或37℃下静置1.5-2小时判定结果，也可延至翌日判定。4.7 判定标准移去玻板，将血凝板放在白纸上，先观察阴性对照血清1:16孔，稀释液对照孔，均应无凝集（血球全部沉入孔底形成边缘整齐的小圆点），或仅出现“ ”凝集（血球大部沉于孔底，边缘稍有少量血球悬浮）。阳性血清对照1:2-1:256各孔应出现“”—“ ”凝集为合格（少量血球沉入孔底，大部血球悬浮于孔内）。在对照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，以呈现“”凝集的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价。例如1号待检血清1-5孔呈现“”—“ ”凝集，6-7孔呈现“”凝集，第8孔呈现“ ”凝集，第9孔无凝集，那么就可判定该份血清的口蹄疫抗体效价为1:128。接种口蹄疫疫苗的猪群免疫抗体效价达到1:128（即第7孔）牛群、羊群免疫抗体效价达到1:256（第8孔）呈现“”凝集为免疫合格。五、检测试剂的性状、规格5.1 性状5.1.1 液体血凝抗原：摇匀呈棕红色（或咖啡色），静置后，血球逐渐沉入瓶底。5.1.2 阴性对照血清：淡黄色清亮稍带粘性的液体。5.1.3 阳性对照血清：微红或淡色稍混浊带粘性的液体。5.1.4 稀释液：淡黄或无色透明液体，低温下放置，瓶底易析出少量结晶，在水浴中加温后即可全溶，不影响使用。5.2 包装5.2.1 液体血凝抗原：摇匀后即可使用，5ml/瓶。5.2.2 阴性血清：1ml/瓶，直接稀释使用。5.2.3 阳性血清：1ml/瓶，直接稀释使用。5.2.4 稀释液：100 ml/瓶，直接使用，4-8℃保存。5.2.5 规格：诊断液5瓶/盒。5.2.6 保存条件及保存期5.2.6.1 液体血凝抗原：4-8℃保存（切勿冻结），保存期3个月。5.2.6.2 阴性对照血清：-15~-20℃保存，有效期1年。5.2.6.3 阳性对照血清：-15~-20℃保存，有效期1年。六、注意事项6.1 为使检测获得正确结果，请在检测前仔细阅读说明书。6.2 严重溶血或严重污染的血清样品不宜检测，以免发生非特异性反应。6.3 勿用90°和130°血凝板，严禁使用一次性血凝板，以免误判结果。6.4 用过的血凝板应及时在水龙头冲净血球。再用蒸馏水或去离子水冲洗2次，甩干水份放37℃恒温箱内干燥备用。检测用具应煮沸消毒，37℃干燥备用。血凝板应浸泡在洗液中（浓硫酸与重铬酸钾按1：1混合），48小时捞出后清水冲净。6.5 每次检测只做一份阴性、阳性和稀释液对照。“-”表示完全不凝集或0-10%血球凝集。“ ”表示10-25%血球凝集 “ ”表示75%血球凝集。“”表示50%血球凝集 “”表示90-100%血球凝集。6.6 用不同批次的血凝抗原检测同一份血清时，应事先用阳性血清准确测定各批次血凝抗原的效价，取抗原效价相同或相近的血凝抗原检测待检血清抗体水平的结果是基本一致的，如果血凝抗原效价差别很大用来检测同一血清样品，肯定会出现检测结果不一致。6.7 收到本试剂盒时，应立即打开包装，取出血凝抗原瓶，用力摇动，使粘附在瓶盖上的红细胞摇下，否则易出现沉渣，影响使用效果。（十四）、合同包2品目号2-49：猪瘟抗体正向血凝一、原理用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验（IHA）。抗原与其对应的抗体相遇，在一定条件下会形成抗原复合物，但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。若将抗原吸附（致敏）在经过特殊处理的红细胞表面，只需少量抗原就能大大提高抗原和抗体的反应灵敏性。这种经过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇，红细胞便出现清晰可见的凝集现象。二、适用范围主要用于检测猪瘟免疫动物血清抗体效价。三、试验器材和试剂3.1 96孔110°V型医用血凝板，与血凝板大小相同的玻板3.2 微量移液器（50μL 25μL）取液塑咀3.3 微量振荡器3.4 猪瘟血凝抗原3.5 猪瘟阴性对照血清3.6 猪瘟阳性对照血清3.7 稀释液3.8 待检血清（每头约0.5ml血清即可）56℃水浴灭活30分钟四、试验方法4.1 加稀释液在血凝板上1-6排的1-9孔；第7排的1-4孔第6-7孔；第8排的1-12孔各加稀释液50μL。4.2 稀释待检血清取1号待检血清50μL加入第1排第1孔，并将塑咀插入孔底，右手拇指轻压弹簧1-2次混匀（避免产生过多的气泡），从该孔取出50μL移入第2孔，混匀后取出50μL移入第3 孔……直至第9孔混匀后取出50μL丢弃。此时第1排1-9孔待检血清的稀释度（稀释倍数）依次为：1:2⑴、1:4⑵、1:8⑶、1:16⑷、1:32⑸、1:64⑹、1:128⑺、1:256⑻、1:512⑼。取2号待检血清加入第2排；取3号待检血清加入第3排……均按上法稀释，注意！每取一份血清时，必须更换塑咀一个。4.3 稀释阴性对照血清在血凝板的第7排第1孔加阴性血清50μL，对倍稀释至第4孔，混匀后从该孔取出50μL丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为1:2⑴、1:4⑵、1:8⑶、1:16⑷。第6-7孔为稀释液对照。4.4 稀释阳性对照血清在血凝板的第8排第1孔加阳性血清50μL，对倍数稀释至第12孔，混匀后从该孔取出50μL丢弃。此时阳性血清的稀释倍数依次为1：2-1：4096。4.5 加血凝抗原被检血清各孔、阴性对照血清各孔、阳性对照血清各孔、稀释液对照孔均各加猪瘟血凝抗原（充分摇匀，瓶底应无血球沉淀）25μL。4.6 振荡混匀将血凝板置于微量振荡器上1-2分钟，如无振荡器，用手轻拍混匀亦可，然后将血凝板放在白纸上观察各孔红血球是否混匀，不出现血球沉淀为合格。盖上玻板，室温下或37℃下静置1.5-2小时判定结果，也可延至翌日判定。4.7 判定标准移去玻板，将血凝板放在白纸上，先观察阴性对照血清1:16孔，稀释液对照孔，均应无凝集（血球全部沉入孔底形成边缘整齐的小圆点），或仅出现“ ”凝集（血球大部沉于孔底，边缘稍有少量血球悬浮）。阳性血清对照1:2-1:256各孔应出现“”—“ ”凝集为合格（少量血球沉入孔底，大部血球悬浮于孔内）。在对照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，以呈现“”凝集的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价。例如1号待检血清1-5孔呈现“”—“ ”凝集，6-7孔呈现“”凝集，第8孔呈现“ ”凝集，第9孔无凝集，那么就可判定该份血清的口蹄疫抗体效价为1:128。接种口蹄疫疫苗的猪群免疫抗体效价达到1:128（即第7孔）牛群、羊群免疫抗体效价达到1:256（第8孔）呈现“”凝集为免疫合格。五、检测试剂的性状、规格5.1 性状5.1.1 液体血凝抗原：摇匀呈棕红色（或咖啡色），静置后，血球逐渐沉入瓶底。5.1.2 阴性对照血清：淡黄色清亮稍带粘性的液体。5.1.3 阳性对照血清：微红或淡色稍混浊带粘性的液体。5.1.4 稀释液：淡黄或无色透明液体，低温下放置，瓶底易析出少量结晶，在水浴中加温后即可全溶，不影响使用。5.2 包装5.2.1 液体血凝抗原：摇匀后即可使用，5ml/瓶。5.2.2 阴性血清：1ml/瓶，直接稀释使用。5.2.3 阳性血清：1ml/瓶，直接稀释使用。5.2.4 稀释液：100 ml/瓶，直接使用，4-8℃保存。5.2.5 规格：诊断液5瓶/盒。5.2.6 保存条件及保存期5.2.6.1 液体血凝抗原：4-8℃保存（切勿冻结），保存期3个月。5.2.6.2 阴性对照血清：-15~-20℃保存，有效期1年。5.2.6.3 阳性对照血清：-15~-20℃保存，有效期1年。六、注意事项6.1 为使检测获得正确结果，请在检测前仔细阅读说明书。6.2 严重溶血或严重污染的血清样品不宜检测，以免发生非特异性反应。6.3 勿用90°和130°血凝板，严禁使用一次性血凝板，以免误判结果。6.4 用过的血凝板应及时在水龙头冲净血球。再用蒸馏水或去离子水冲洗2次，甩干水份放37℃恒温箱内干燥备用。检测用具应煮沸消毒，37℃干燥备用。血凝板应浸泡在洗液中（浓硫酸与重铬酸钾按1：1混合），48小时捞出后清水冲净。6.5 每次检测只做一份阴性、阳性和稀释液对照。“-”表示完全不凝集或0-10%血球凝集。“ ”表示10-25%血球凝集 “ ”表示75%血球凝集。“”表示50%血球凝集 “”表示90-100%血球凝集。6.6 用不同批次的血凝抗原检测同一份血清时，应事先用阳性血清准确测定各批次血凝抗原的效价，取抗原效价相同或相近的血凝抗原检测待检血清抗体水平的结果是基本一致的，如果血凝抗原效价差别很大用来检测同一血清样品，肯定会出现检测结果不一致。6.7 收到本试剂盒时，应立即打开包装，取出血凝抗原瓶，用力摇动，使粘附在瓶盖上的红细胞摇下，否则易出现沉渣，影响使用效果。（十五）、合同包2品目号2-50：口蹄疫VP1抗体使用目的：本试剂盒用于定性测定猪血清，血浆及相关液体样本中口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体（FMDV-VP1-Ab）水平。实验原理本试剂盒采用间接法测定标本中猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体（FMDV-VP1-Ab）水平。用纯化的抗口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗原，与样品中口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体（FMDV-VP1-Ab）温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体（FMDV-VP1-Ab）的存在与否。， 标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融操作步骤1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照（不加样品、生物素标记的抗-IgG抗体、链霉亲和素-HRP）1孔2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，37℃温育45分钟。3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。5. 加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl（空白孔除外）。37℃温育30分钟6. 洗涤：操作同4。7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP（空白孔除外），轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。8. 洗涤：操作同4。9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值 0.15阴性判定：样品OD值 临界值（CUT OFF）者为口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体（FMDV-VP1-Ab）阴性阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体（FMDV-VP1-Ab）阳性注意事项1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1．试剂盒保存：2-8℃。有效期到用户手上有效期应≥6个月。（十六）、合同包2品目号2-51：小反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒用途：用于检测疑似感染动物的眼鼻分泌物、鼻咽拭子和抗凝血（病毒血症期）以及剖检动物的脾脏、肺脏、淋巴结（肠道或肺门）和肠，适用于PPRV的检测、诊断和流行病学调查。【组分与用法】 编号名称装量用法保存条件1反应阳性对照品（绿盖）30 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存（最好-80°C保存）2荧光RT-PCR反应液（棕色盖）1075 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存3酶混合液（棕色盖）25μl/管 ×1管直接使用-20°C保存【用法与判定】1样本处理可采用Roche、QIAGEN等公司生产的RNA纯化试剂盒提取各类样本中的RNA，或其他RNA提取方法提取各类样本中的RNA。如在2小时内检测则提取的RNA置于冰上保存，否则置于﹣80oC冰箱保存。2扩增试剂准备每份被检样品使用1个PCR管，每管中依次加入：荧光RT-PCR反应液21.5μl（含ROX参比荧光），酶混合液0.5μl，被检样品中提取的RNA溶液 3μl，最终反应体积为25μl。每次检测设置标准阳性对照和标准阴性对照（加3μl）。标准阳性对照用反应阳性对照品作为模板，而标准阴性对照用无RNA酶污染的纯水作为模板。3RT-PCR反应加样后，将PCR管置于PCR仪内进行如下反应：50oC, 30 min进行反转录；然后95oC, 3 min进行Taq酶的激活；然后进行45个循环的PCR扩增（扩增条件为94oC, 15 sec，60oC 1min收集荧光信号，其中报告荧光为FAM，淬灭荧光为TAMRA）。4结果判断如果待测样品的Ct值小于30则结果判为强阳性，Ct值大于30小于40则判为弱阳性，Ct值大于40则判为阴性。【贮藏与有效期】荧光RT-PCR反应液和酶混合液应冻存于-20oC冰箱，避免反复冻融。阳性对照品最好冻存于-80oC冰箱。有效期暂定为6个月。（十七）、合同包2品目号2-52：小反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒用途：用于检测疑似感染动物的眼鼻分泌物、鼻咽拭子和抗凝血（病毒血症期）以及剖检动物的脾脏、肺脏、淋巴结（肠道或肺门）和肠，适用于PPRV的检测、诊断和流行病学调查。【组分与用法】 编号名称装量用法保存条件1反应阳性对照品（绿盖）30 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存（最好-80°C保存）2荧光RT-PCR反应液（棕色盖）1075 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存3酶混合液（棕色盖）25μl/管 ×1管直接使用-20°C保存【用法与判定】1样本处理可采用Roche、QIAGEN等公司生产的RNA纯化试剂盒提取各类样本中的RNA，或其他RNA提取方法提取各类样本中的RNA。如在2小时内检测则提取的RNA置于冰上保存，否则置于﹣80oC冰箱保存。2扩增试剂准备每份被检样品使用1个PCR管，每管中依次加入：荧光RT-PCR反应液21.5μl（含ROX参比荧光），酶混合液0.5μl，被检样品中提取的RNA溶液 3μl，最终反应体积为25μl。每次检测设置标准阳性对照和标准阴性对照（加3μl）。标准阳性对照用反应阳性对照品作为模板，而标准阴性对照用无RNA酶污染的纯水作为模板。3RT-PCR反应加样后，将PCR管置于PCR仪内进行如下反应：50oC, 30 min进行反转录；然后95oC, 3 min进行Taq酶的激活；然后进行45个循环的PCR扩增（扩增条件为94oC, 15 sec，60oC 1min收集荧光信号，其中报告荧光为FAM，淬灭荧光为TAMRA）。4结果判断如果待测样品的Ct值小于30则结果判为强阳性，Ct值大于30小于40则判为弱阳性，Ct值大于40则判为阴性。【贮藏与有效期】荧光RT-PCR反应液和酶混合液应冻存于-20oC冰箱，避免反复冻融。阳性对照品最好冻存于-80oC冰箱。有效期暂定为6个月。（十八）、合同包2品目号2-53：小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测试剂盒【组分与用法】编号名称装量用法1抗原包被的酶标板5块直接使用2酶标单抗（5×）5mL/瓶×1瓶用稀释液做5倍稀释3阳性血清400μL /管×2管直接使用4阴性血清400μL /管×2管直接使用5稀释液55mL/瓶×1瓶直接使用6洗涤液（20×）100mL/瓶×1瓶用双蒸水做20倍稀释，按0.5‰比例加入吐温-207吐温-201.5mL/管×1管直接使用8底物溶液30mL/瓶×1瓶直接使用9终止液30mL/瓶×1瓶直接使用【作用与用途】用于监测羊群中PPRV抗体水平。【用法与判定】1操作步骤酶标板上对照和样品的分布图：123456789101112AＰS3BＰS4CＮS5DＮECmFCmGS1HS2注：P—阳性血清对照孔N—阴性血清对照孔Cm—酶标单抗对照孔S1、S2、S3、S4等—表示加待检血清孔1)在A1和B1抗原包被孔加入阳性血清，50μL/孔。2)在C1和D1抗原包被孔中加入阴性血清，50μL/孔。3)在E1和F1抗原包被孔中加入稀释液，50μL/孔。4)在样品孔中加入稀释液，40μL/孔。5)在样品孔中再加入待检血清，10μL/孔。6)37℃孵育60min。7)弃去反应孔中的液体。8)每孔用洗涤液清洗4次，洗涤液（1×）300μL/孔。9)每次除去洗涤液后，在吸水纸上拍打，除去残留的液体。10)每孔加入酶标单抗（1×），50μL/孔。11)37℃孵育30min。12)重复步骤7至9。13)每孔加入底物溶液，50μL/孔。14)室温避光作用10-15min。15)每孔中加入50μL终止液，终止所有的反应。16)用酶标仪在450nm的波长下测定各孔OD450nm值，计算阻断率。阻断率（PB）计算方法：2结果判定1)阳性对照阻断率（PB）＞60，阴性对照阻断率（PB）＜40，试验结果有效；否则，应重新进行试验。2)待检样品阻断率（PB）＞50，判为阳性。3)待检样品阻断率（PB）≤50，判为阴性。【注意事项】1)本试剂盒严禁冻结。2)所有试剂在使用前恢复至室温。3)试剂盒各种组分均为专用，不得交叉使用，以免污染。4)底物溶液避光保存，使用后立刻拧紧试剂瓶盖，并放试剂盒内。【规格】450头份【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期6个月。（十九）、合同包2品目号2-54：小反刍兽疫RT-PCR检测试剂盒用途：用于检测疑似感染动物的眼鼻分泌物、鼻咽拭子和抗凝血（病毒血症期）以及剖检动物的脾脏、肺脏、淋巴结（肠道或肺门）和肠，适用于PPRV的检测、诊断和流行病学调查。原理利用离心柱内硅基质膜提取RNA，在反转录酶的作用下，以RNA为模板，以引物为起点合成与RNA模板互补的cDNA链。在TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异DNA片段的拷贝数放大一倍。经过35次循环，最终使扩增DNA片段放大了数百万倍。将扩增DNA片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到DNA片段的扩增带。试剂盒组成名称10头份50头份贮藏条件0.2 mL薄壁PCR管15个60个室温（A盒）吸附柱和收集管10 套50套裂解液6 mL30 mL洗液12 mL60 mL洗脱液1 mL10 mL矿物油300 μL1.2 mL50倍TAE电泳缓冲液（50倍稀释后使用）20 mL100 mL染色液20 μL50 μL阴性对照350 μL1 mL-20 ℃（B盒）阳性对照350 μL1 mLRT-PCR反应液200 μL1 mLX液5 μL10 μL酶混合液15 μL65 μL1．染色液低毒，操作时应戴上手套，避光保存，较长时间不使用请存放于4℃，以免挥发变干。染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。2．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。3．严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。4．反复冻融试剂将减低检测灵敏度，建议在3次内用完，请严格按试剂盒说明书操作。样品制备1 样品采集：病死或扑杀的动物，取脾脏、肺脏、淋巴结（肠道或肺门）和肠等组织；待检的活动物，取眼鼻分泌物或鼻咽拭子置于50%甘油生理盐水中，或抗凝血（病毒血症期）。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融。）2 样品处理：每份样品分别处理。2.1 组织样品处理：每份组织分别从三个不同的位置称取样品约1g，用手术剪剪碎混匀后取0.05 g于研磨器中研磨，加入1.5 mL生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5 mL灭菌离心管中，8000 rpm离心2 min，取上清液100 μL于1.5 mL灭菌离心管中。2.2 眼鼻分泌物或鼻咽拭子处理：涡旋震荡30s，取100 μL，置1.5 mL灭菌离心管中。2.3 抗凝血：取100 μL，置1.5 mL灭菌离心管中。2.4 阳性对照处理：取阳性对照100 μL，置1.5 mL灭菌离心管中。2.5 阴性对照处理：取阴性对照100 μL，置1.5 mL灭菌离心管中。操作步骤1 病毒RNA的提取1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液600 μL，充分颠倒混匀，室温静置3～5 min。1.2 将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），13000 rpm离心30 s。1.3 弃去收集管中液体，加入600 μL洗液，13000 rpm离心30 s。1.4 重复步骤1.3。1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm空柱离心2 min，以除去残留的洗涤液。1.6 将吸附柱移入新的1.5 mL离心管中，向柱中央加入洗脱液50 μL，室温静置1 min，13000 rpm离心30 s，离心管中液体即为模板RNA。2 RT-PCR扩增每份总体积20 μL，含16.8 μL RT-PCR反应液（用前混匀），1.2 μL酶混合液，2 μL模板RNA。例如：n份样品，配制n 1份，16.8×（n 1）RT-PCR反应液，再加入1.2×（n 1）酶混合液，混匀后取18 μL分装成n份，分别加入2 μL模板RNA（阳性对照管加入1 μL阳性对照RNA和1 μL X液），加入矿物油20 μL覆盖（有热盖的PCR扩增仪不用加矿物油），作好标记。在PCR扩增仪上进行以下程序：42 ℃ 45 min，94 ℃ 3 min；循环94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共35次；再72 ℃延伸7 min。3 电泳称1.5 g琼脂糖放于500 mL锥形瓶中，加入50倍稀释的TAE电泳缓冲液200 mL（取4 mL 50倍TAE电泳缓冲液，用双蒸水稀释至200 mL），于微波炉中熔解，再加入10 μL染色液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR扩增产物10 μL，点样于琼脂糖凝胶孔中，以110～120V电压于50倍稀释的TAE电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。结果判定 阳性对照出现350 bp/420bp扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，实验结果成立。被检样品出现350b/420bpp扩增带为小反刍兽疫病毒阳性，否则为阴性。保存期本产品有效期为6个月。（二十）、合同包2品目号2-55：小反刍兽疫实时荧光RT-PCR检测试剂盒用途采用实时荧光RT-PCR方法检测疑似感染动物的眼鼻分泌物、鼻咽拭子和抗凝血（病毒血症期）以及剖检动物的脾脏、肺脏、淋巴结（肠道或肺门）和肠中的小反刍兽疫病毒（PPRV）的RNA。适用于PPRV的诊断、检测和流行病学调查。原理利用离心柱内硅基质膜提取样品总RNA，在高效反转录酶的作用下，以RNA为模板，以引物为起点合成与RNA模板互补的cDNA链。在热启动Taq酶的作用下，经高温变性、中温退火及延伸的循环，使特异DNA片段的拷贝数放大一倍，经荧光素标记的探针与扩增的DNA杂交，利用Taq聚合酶的5→3外切活性，使荧光探针的报告基团与淬灭基团分离，发出特异性荧光信号，利用荧光PCR仪检测特异性荧光信号，根据样品Ct值的大小及扩增曲线的形成情况判定结果。试剂盒组成名称50头份贮藏条件裂解液30 mL室温（A盒）洗液60 mL洗脱液10 mL吸附柱和收集管50套阴性对照1 mL-20 ℃（B盒）阳性对照600 μL无菌无核酸酶水600 μLRT-PCR反应液600 μL酶混合液24 μL荧光探针115 μL样品制备1 样品采集：病死或扑杀的动物，取脾脏、肺脏、淋巴结（肠道或肺门）和肠等组织；待检的活动物，取眼鼻分泌物或鼻咽拭子置于50%甘油生理盐水中，或抗凝血（病毒血症期）。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融。）2 样品处理：每份样品分别处理。2.1 组织样品处理：每份组织分别从三个不同的位置称取样品约1g，用手术剪剪碎混匀后取0.05 g于研磨器中研磨，加入1.5 mL生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5 mL灭菌离心管中，8000 rpm离心2 min，取上清液100 μL于1.5 mL灭菌离心管中。2.2 眼鼻分泌物或鼻咽拭子处理：涡旋震荡30s，取100 μL，置1.5 mL灭菌离心管中。2.3 抗凝血：取100 μL，置1.5 mL灭菌离心管中。2.4 阳性对照处理：取阳性对照100 μL，置1.5 mL灭菌离心管中。2.5 阴性对照处理：取阴性对照100 μL，置1.5 mL灭菌离心管中。操作步骤1 病毒RNA的提取1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液600 μL，充分颠倒混匀，室温静置3～5 min。1.2 将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱），13000 rpm离心30 s。1.3 弃去收集管中液体，加入600 μL洗液，13000 rpm离心30 s。1.4 重复步骤1.3。1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm空柱离心2 min，以除去残留的洗涤液。1.6 将吸附柱移入新的1.5 mL离心管中，向柱中央加入洗脱液50 μL，室温静置1 min，13000 rpm离心30 s，离心管中液体即为模板RNA。2 实时荧光RT-PCR扩增设被检样品、阴性对照和阳性对照总和为N，则反应体系配制如下：试剂体系无菌无核酸酶水2.7（N 1）μLRT-PCR反应液10（N 1）μL酶混合液0.4（N 1）μL荧光探针1.9（N 1）μL将以上配制的反应体系充分混匀后，分装每个反应管中各15 μL。分别取5 μL模板RNA，加入相应反应管中，混匀并作好标记，在荧光PCR仪上进行以下反应：45 ℃ 15 min，95 ℃ 1min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，在每个循环第二步（60℃ 35s）收集荧光信号，共40个循环。（报告基团“FAM”，淬灭基团“None”）。结果判定1 结果分析条件设定阈值设定原则：阈值线设定于刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。不同仪器可根据仪器噪音情况进行调整。2 结果描述及判定阳性对照Ct值≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照无Ct值并且无特定扩增曲线，实验结果成立；被检样品Ct值≤30并出现特定的扩增曲线为小反刍兽疫病毒阳性；被检样品30＜Ct＜37并出现特定的扩增曲线，需重新取样提取RNA，扩增后进行结果判定，如仍是可疑，可判定为阳性；被检样品Ct值≥37时，超过本方法检测灵敏度范围，判定为阴性；对于某些未呈现S型曲线，但本底较高的样品，应为阴性。保存期本产品有效期为6个月。合同包3各品目号的技术参数如下：（一）、合同包3品目号3-1：高致病性猪蓝耳病抗体检测试剂盒检测目的检测高致病性猪蓝耳病抗体。提供出厂合格证书。检测方法间接ELISA。规格480次/盒。试剂盒内容酶标板5块；洗液10×：250mL；样本稀释液3×：100mL；酶标复合物：30mL；底物：30mL；终止液：30mL；阳性对照：2.2mL；阴性对照：2.2mL；盖膜：10块。操作步骤：1)所有试剂回到室温。2)阴阳性对照不要稀释，样品要进行200倍稀释。3)阴阳性对照必须是双孔。4)加50μL阳性对照、阴性对照、及稀释的样品到反应板中。5)盖膜，37℃作用60min。6)去膜，用300μL洗液洗涤3遍，拍干。7)在每个孔中加入50μL酶标抗体。8)盖膜，37℃作用60min。9)去掉膜，用洗液(300μL)洗3次，拍干。10)加入50μL底物，(20～25)℃作用10min。11)加入50μL终止液，混匀。12)(10～15)min之内在450nm下读数并记录结果。结果判定阳性对照平均值OD应大于0.6，且阳性对照/阴性对照平均值大于4.0结果用IRCP表示 每个样品得出一个(S/P)值结果S/P≤20%阴性S/P＞20%阳性有效期到用户手上有效期应≥6个月。（二）、合同包3品目号3-2：禽鼻气管炎抗体检测试剂盒鼻气管炎鸟杆菌（ORT）ELISA抗体检测试剂盒，可以从鸡和火鸡的血清样品中检测到ORT的抗体含量。微量板用灭活的ORT抗原包被，将稀释的血清样品加入到微量孔中，样品中ORT抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性抗体和其它血清蛋白被洗去。将碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加入孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。pNPP显色剂作为底物被加入，如果抗ORT抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的抗ORT抗体的量有关系。提供的试剂ORT包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性ORT抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管 蒸馏水或去离子水 含405nm波长的酶标仪注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:100稀释，即1μl样品加100μl的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！！ 操作步骤1．从密封袋中取出用ORT包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表ORT抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定S/P值大于等于1.0 可判定为阳性1．S/P值的计算 2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.75×Log10 S/P 3.156逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.999 ≤1431阴性≥1.0 ≥1432阳性（三）、合同包3品目号3-3：减蛋综合症抗体检测试剂盒产蛋下降综合征（EDS）ELISA检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测到EDS抗体的量。微量板用已灭活的EDS抗原包被，将稀释的鸡血清样品加入到微量孔中，样品中EDS抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性抗体和其它血清蛋白被洗去。将碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加入孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。pNPP显色剂作为底物被加入，如果EDS抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的EDS抗体的量有关。提供的试剂EDS包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性EDS抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供）精确的微量移液器和一次性吸头8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管蒸馏水或去离子水含405nm波长的酶标仪注意事项1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃避光下保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新的吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！操作步骤1．从密封袋中取出用EDS包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表EDS抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定1．S/P值的计算 S/P值大于等于0.5 可判定为阳性2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.14×Log10S/P 3.156逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.499≤649阴性≥0.500≥650阳性（五）、合同包3品目号3-4至3-8：败血支原体/滑液支原体/火鸡支原体/火鸡支原体/（败血支原体/滑液支原体）/（败血支原体/滑液支原体/减蛋综合症）抗体检测试剂盒提供的试剂包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性MS抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管 蒸馏水或去离子水 含405nm波长的酶标仪注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！！ 操作步骤1．从密封袋中取出用MS包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表MS抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定S/P值大于等于0.5 可判定为阳性1．S/P值的计算 2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.27×Log10 S/P 3.156逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.499≤593阴性≥0.500≥594阳性（六）、合同包3品目号3-9至3-11：肠炎沙门氏菌/鼠伤寒沙门氏菌/肠炎沙门氏菌/鼠伤寒沙门氏菌抗体检测试剂盒提供的试剂包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性MS抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管 蒸馏水或去离子水 含405nm波长的酶标仪注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！！ 操作步骤1．从密封袋中取出用MS包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表MS抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定S/P值大于等于0.5 可判定为阳性1．S/P值的计算 2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.27×Log10 S/P 3.156逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.499≤593阴性≥0.500≥594阳性（七）、合同包3品目号3-12：鼻气管炎鸟杆菌抗体检测试剂盒鼻气管炎鸟杆菌（ORT）ELISA抗体检测试剂盒，可以从鸡和火鸡的血清样品中检测到ORT的抗体含量。微量板用灭活的ORT抗原包被，将稀释的血清样品加入到微量孔中，样品中ORT抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性抗体和其它血清蛋白被洗去。将碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加入孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。pNPP显色剂作为底物被加入，如果抗ORT抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的抗ORT抗体的量有关系。提供的试剂ORT包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性ORT抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管 蒸馏水或去离子水 含405nm波长的酶标仪注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:100稀释，即1μl样品加100μl的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！！ 操作步骤1．从密封袋中取出用ORT包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表ORT抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定S/P值大于等于1.0 可判定为阳性1．S/P值的计算 2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.75×Log10 S/P 3.156逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.999 ≤1431阴性≥1.0 ≥1432阳性（八）、合同包3品目号3-13：传法抗体抗体检测试剂盒传染性法氏囊（IBD）ELISA检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测IBD抗体的数量。微量板用已灭活的IBD抗原包被，将稀释的鸡的血清样品加入到微量孔中，样品中抗IBD抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性的抗体和其它的血清蛋白被洗去。用碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加到孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。PNPP显色剂作为底物被加入，如果抗IBD抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的抗IBD抗体的数量有关系。提供的试剂IBD包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性IBD抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供）精确的微量移液器和一次性吸头8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管蒸馏水或去离子水含405nm波长的酶标仪注意事项1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，把用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能够取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用。使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新的吸头。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！操作步骤1．从密封袋中取出用IBD包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表IBD抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定1．S/P值的计算 S/P值大于等于0.2 可判定为阳性2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.1×Log(S/P) 3.361逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.199 ≤390 阴性≥0.200 ≥391 阳性（九）、合同包3品目号3-14：传支抗体抗体检测试剂盒传染性支气管炎（IBV） ELISA检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测IBV抗体的数量。微量板用已灭活的IBV抗原包被，将稀释的鸡的血清样品加入到微量孔中，样品中抗IBV抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性的抗体和其它的血清蛋白被洗去。用碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加到孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。PNPP显色剂作为底物被加入，如果抗IBV抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的抗IBV抗体的数量有关系。提供的试剂IBV包被板（Coated plates）：包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性IBV抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管 蒸馏水或去离子水 含405nm波长的酶标仪注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！ 操作步骤1．从密封袋中取出用IBV包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表IBV抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定1．S/P值的计算 样品的S/P值大于等于0.2判为阳性。2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.0×Log10(S/P) 3.62逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.199 ≤833 阴性≥0.200 ≥834 阳性（十）、合同包3品目号3-15：REO抗体抗体检测试剂盒呼肠孤（REO）ELISA检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测REO抗体的数量。微量板用已灭活的REO抗原包被，将稀释的鸡的血清样品加入到微量孔中，样品中抗REO抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性的抗体和其它的血清蛋白被洗去。用碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加到孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。PNPP显色剂作为底物被加入，如果抗REO抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的抗REO抗体的数量相关。提供的试剂REO包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性REO抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管 蒸馏水或去离子水 含405nm波长的酶标仪注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！！ 操作步骤1．从密封袋中取出用REO包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表REO抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定样品的S/P值大于等于0.2判为阳性。1．S/P值的计算 2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.1×Log10(S/P) 3.9逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.199 ≤1351 阴性≥0.200 ≥1352 阳性（十一）、合同包3品目号3-16：禽白血病病毒抗原检测ELISA抗体检测试剂盒规格(96孔╳2板)/盒用途检测鸡血清中禽白血病病毒抗原。试剂构成ALV包被板：5块；ALV阳性对照，稀释的鸡抗ALV抗体，叠氮钠防腐：1.9mL；阴性对照，稀释的无ALV 抗体鸡血清，叠氮钠防腐：1.9mL；BioChek辣根过氧化物酶标记的(羊抗)鸡抗体，庆大霉素防腐：50mL 样品稀释缓冲液，叠氮钠防腐：235mL；TMB底物液：60mL；终止液：60mL。样品的处理 检测之前要用样品稀释液将被检样品进行500倍稀释(如：1μL的样品可以用样品稀释液稀释倒500μL)。注意不能稀释对照。不同的样品要注意换吸头。将样品加入检测板前要将样品充分混匀。 操作步骤 1)在试剂恢复到室温后，并将其振摇混匀再进行使用。2)取出抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置。3)取100μL未稀释的阴性对照液加入A1孔和A2孔中。4)取100μL未稀释的阳性对照液加入A3孔和A4孔中。5)取100μL稀释的被检样品液加入相应的孔中。所有被检样品都应进行双孔测定。6)室温下孵育30 min。7)每孔加约350μL的蒸馏水或去离子水进行洗板，洗3～5次。8)每孔加100μL的酶标羊抗鸡抗体。9)室温下孵育30 min。10)重复洗板。11)每孔加100μL的TMB底物液。12)室温下孵育15 min。13)每孔加100μL的终止液。14)酶联检测仪空气调零。15)测定各孔于650nm波长的吸光值(A650)。结果 只有阳性对照平均值和阴性对照平均值的差值大于 0.075，阴性对照平均值小于或等于0.150，该检测结果才能有效。检测样品中是否含有禽白血病病毒的抗体主要由该样的测定值与阳性对照平均值的比值决定。阳性对照已进行标准化处理，含有显著水平的抗禽白血病病毒抗体。被检样品的抗体水平主要由其测定值与阳性对照测定值的比值(S/P)确定。抗体滴度按下列方程式进行计算。 结果判定 S/P比值小于或等于0.4，判为阴性。S/P值大于 0.4(抗体滴度大于844) ，判为阳性，表明该动物已进行了免疫或感染了禽白血病病毒(A 亚群或B亚群) 。 计算方法阴性对照平均值(NCX)：[A1(A650) A2(A650)]/2=NCX 阳性对照平均值(PCX)：[ A3(A650) A4(A650)]/2=PCX S/P比值：(样品平均值-NCX)/(PCX-NCX)= S/P 1:500稀释样品S/P 比值与其抗体滴度的关系：Log10 抗体滴度=1.09(Log10S/P) 3.36有效期到用户手上有效期应≥6个月。（十二）、合同包3品目号3-17：禽脑脊髓炎抗体抗体检测试剂盒禽脑脊髓炎（AE）ELISA检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测到AE抗体的量。微量板用已灭活的AE抗原包被，将稀释的鸡血清样品加入到微量孔中，样品中AE抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性抗体和其它血清蛋白被洗去。将碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体加入孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。PNPP显色剂作为底物被加入，如果抗AE抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的抗AE抗体的量有关系。提供的试剂AE包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性AE抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管 蒸馏水或去离子水 含405nm波长的酶标仪注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！操作步骤 1．从密封袋中取出用AE包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表AE抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定 1．S/P值的计算 S/P值大于等于0.5 可判定为阳性2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.1×Log10(S/P) 3.361 逆对数＝效价 3．判定标准S/P值效价范围 抗体状况≤0.499≤1070阴性≥0.500≥1071阳性（十三）、合同包3品目号3-18：网内增生抗体抗体检测试剂盒用途检测鸡血清中网状内皮组织增殖症病毒(REV)抗体的酶联免疫检测试盒。 试剂REV包被板：5块；REV阳性对照血清：含REV 抗体，已经稀释，用叠氮化钠保护1.9mL；REV阴性对照血清：不含REV抗体，已经稀释，用叠氮化钠保护1.9mL；酶标抗体，(山羊)抗鸡抗体-辣根过氧化物酶(HRPO)结合物50mL 样品稀释液，用叠氮化钠保护：235mL；TMB底物：60mL；终止液：60mL。样品准备在检测前用样品稀释液将样品作500倍稀释(如：1μL 500μL或三步稀释法：1：90μL 10μL；2：90μL 10μL；3：120μL 30μL)注意不要稀释对照血清。每个样品都要换一个滴头，样品加入抗原包被孔之前要充分混合均匀。 操作步骤1)各组分放置至室温(20-25℃)，颠倒摇动混合均匀。2)取出包被板，在表上记录样品位置。3)加100 μL不需稀释的阴性对照血清至A1和A2孔。4)加100μL不需稀释的阳性对照血清至A3和A4孔。5)加100μL稀释好的样品至相应的孔。6)在室温孵育30min。7)用大约350μL蒸馏水或去离子水洗涤微孔3～5次。 8)每孔加入100μL酶标羊抗鸡抗体(HRPO)。9)在室温孵育30min。10)重复洗涤。11)每孔加100μL TMB底物溶液。 12)在室温下孵育15min。 13)每孔加100μL终止液终止反应。 14)在空气中读空白数。 15)在650nm，A(650)测量和记录吸光值。 试验有效性只有在阳性对照孔所得的均值减去阴性对照孔所得值的均值(PCX-NCX)大于 0.075时，阴性对照孔所得值的均值小于或等于0.150时，测定结果才有效。REV抗体的存在与否由样品对阳性的S/P值来决定。阳性对照是标准化的，代表鸡血清的有效抗体水平。样品抗体的相对水平由样品对阳性的S/P比值来决定。终点滴度可以通过后面列出的关系式计算得出。 结果判定样品的S/P值小于或等于0.5，判为阴性。 样品的S/P值大于0.5(滴度大于1076)，判为阳性。 计算方法阴性对照平均值(NCX)：A1孔(650)A2孔(650)/2 =NCX阳性对照平均值(PCX)：A3孔(650)A4孔(650)/2=PCXS/P值：样品(650)-NCX(650)/PCX-NCX=S/P 与S/P 的关系式：Log 滴度=1.09(LogS/P) 3.36有效期到用户手上有效期应≥6个月。（十四）、合同包3品目号3-19：传喉抗体抗体检测试剂盒传染性喉气管炎（ILT）抗体ELISA检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测ILT抗体的量。微量板用已灭活的ILT抗原包被，将稀释的鸡血清样品加入到微量孔中，样品中ILT抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性抗体和其它血清蛋白被洗去。将碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加入孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。pNPP显色剂作为底物被加入，如果ILT抗体存在，则显黄色。颜色强度与样品中抗ILT抗体的含量相关。提供的试剂ILT包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性ILT抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供） 精确的微量移液器和一次性吸头 8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管 蒸馏水或去离子水 含405nm波长的酶标仪注意事项 1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。3．稀释管清晰地标有样品号。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！ 操作步骤1．从密封袋中取出用ILT包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表ILT抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定1．S/P值的计算 S/P值大于等于0.5 可判定为阳性2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.1×Log10S/P 3.361逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.499 ≤1070 阴性≥0.500 ≥1071 阳性（十五）、合同包3品目号3-20：鸡传贫抗体抗体检测试剂盒鸡传染性贫血（CAV）ELISA检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测CAV抗体的数量。微量板用已灭活的CAV抗原包被，将稀释的鸡的血清样品加入到微量孔中，样品中抗CAV抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性的抗体和其它的血清蛋白被洗去。用碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加到孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。PNPP显色剂作为底物被加入，如果抗CAV抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的抗CAV抗体的数量有关系。提供的试剂CAV包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。阳性对照(Positive Control):含特异性CAV抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。材料和设备要求（试剂盒未提供）精确的微量移液器和一次性吸头8或12孔道的微量移液器稀释样品的塑料管蒸馏水或去离子水含405nm波长的酶标仪洗板机注意事项1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，把用过的反应板和废弃液进行消毒。3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。4．试剂盒仅供体外使用。5．严格按照检测规程操作才能够取得最好的结果。试剂的准备1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在 4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在 4℃保存1个月。3．试剂盒中的其它成分可以直接使用。使用前要回温至室温（22-27℃）。样品的准备每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！操作步骤1．从密封袋中取出用CAV包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。4．加100μl稀释好的样品到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。7．重复步骤5。8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。9．各孔加100μl终止液，终止反应。10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。结果为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表CAV抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。结果判定1．S/P值的计算 S/P值大于等于0.35 可判定为阳性2．抗体滴度的计算Log10效价＝1.1×Log10S/P 3.361逆对数＝效价3．判定标准S/P值 效价范围抗体状况≤0.349 ≤724 阴性≥0.350 ≥725 阳性合同包4各品目号的技术参数如下：（一）、合同包4品目号4-1：猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测ELISA规格(96孔╳5板)/盒用途检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体。试剂所有的试剂均贮存于2℃-8℃ 用病毒抗原包被的ELISA反应板，阳性对照，阴性对照，辣根过氧化物酶标记(HRPO)的抗猪瘟病毒的酶标抗体，样品稀释液，A.洗涤液(10×)，B. TMB底物，C. 终止液。自备器材精确的单道微量移液器和多道微量移液器，适用于吸取10μL～1000μL的液体，一次性移液器吸头，配制洗涤液用的500mL量筒，96孔酶标仪，纯化水(超纯水或双蒸水)，滴加和吸去洗涤液的设备，可以盛装液体和消毒液的容器，湿盒或密封反应板用的封条，涡旋混合装置，离心管或微量试管。注意事项把它当作潜在的传染源来处理所有的生物材料。禁用嘴吸液。处理样品和试剂盒的地方禁止饮食和吸烟。底物溶液对眼睛、皮肤以及呼吸系统都有刺激作用，在使用过程中避免接触眼睛和皮肤。避免底物TMB照到强光，或接触到氧化剂。盛装TMB溶液的容器要用干净的玻璃或塑料器皿。所有试剂一律放置2-8℃ 保存。所有试剂用前恢复至室温18-25℃，用完后返回到2-8℃以便下次使用。用过的材料要无害化处理。使用处理各个试剂时要小心操作，严防对试剂的污染。不要使用过期的试剂盒；禁止非同批试剂盒混用。严格按照操作程序，仔细地吸液、计时、充分洗涤，对于获得精确和准确的结果是非常必要的。每次检测均要加做2个阴、阳性对照。在检测中，试剂的准备应用双蒸水或去离子水配制。没有用完的微量反应板应贮存在密封塑料袋内，于2-8℃存放。仅供兽医专用。 试剂准备包被的微量反应板、样品稀释液、阳性对照、阴性对照、酶标抗体、底物溶液和终止液都是即用试剂。 洗涤液：(10×)浓缩的洗涤液应在恢复至室温并充分的混合确保结晶的盐溶解。在使用前用纯化水(超纯水或双蒸水)进行10倍稀释。无菌条件下制备的1×洗涤液在(2～8) ℃可保存1周。例如：300mL的洗涤液需用30mL的浓缩洗涤液和270mL的纯化水(超纯 水或双蒸水)充分混合配制而成。 样品准备：新鲜的、冷藏(4°C少于8天)的、冰冻的血清或血浆都可以用于检测。 操作步骤 1)在使用前，所有的试剂盒组分都必须恢复到室温(18～25)℃。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。 2)分别将50μL样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中。 3)分别将50μL的阳性对照和阴性对照加入到相应的对照孔中，注意不同对照的吸头需要更换。 4)分别将50μL的被检样品加入到剩下的检测孔中，注意每个样本都使用不同吸头。5)轻弹微量反应板或用振荡器振荡，将反应板中的溶液混匀。6)在室温下(18～25℃)孵育2小时或过夜孵育(12～18)小时。无论选择哪种孵育方式，都要将微量反应板用封条封闭或于湿箱中室温孵育，避免液体挥发。 7)用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在加入下一个试剂前，避免孔壁变干。8)加入100μL辣根过氧化物酶标记(HRPO)的抗猪瘟病毒的酶标抗体(即取即用)加入反应孔中，用封条封闭反应板或湿盒中室温下孵育30min。9)重复洗涤。10)每个反应孔中加入100μL的底物溶液到反应孔中，并于避光、室温条件下放置10min。加完第一孔后即可计时。11)在第10min时每个反应孔中加入100μL的终止液终止反应。加终止液的顺序与底物的加入顺序相同。12)在450nm处测定样本以及对照的吸光度值，也可用双波长(450nm和650nm)测定样本以及对照的吸光度值，空气调零。13)计算样本和对照的平均吸光度值(见计算)。 结果只有阴性对照的平均OD450大于0.500，阳性对照的阻断率大于50％，该检测结果才能有效。若试验不成立，有可能是实验操作失误造成，应重读说明书，再操作一次。 计算方法 阴性对照平均值，阳性对照平均值，样本的计算。NC1A450NC2A450 PC1A450PC2A450 NCX-sampLe A450 NCX = PCX = BLocking%= *100% 2 2 NCX 例如： 例如： 例如：样品结果为1.2191.28 1.300 = 1.290 0.120 0.140 = 0.130 1.290-1.219 = 5.5% 2 2 1.290 结果判定 如果被检样本的阻断率大于或等于40％，该样本就可以被判为阳性(有CSFV抗体存在)。 如果被检样本的阻断率小于或等于30％，该样本就可以被判为阴性(无抗CSFV抗体存在)。 如果被检样本的阻断率在30-40％之间，就应在数日后再对该动物进行重测。如果重测结果仍为可疑，就应用血清中和实验方法鉴定。请参照本国相关的有效规章制度。 检测方法总结在每一次进行该检测前，强烈建议全面认真阅读说明书。 样品稀释液的加入：在使用前，所有的试剂盒组分都必须恢复到室温(18～25)℃。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。分别将50μL样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中。 样品的加入：分别将50μL的阳性对照和阴性对照加入到相应的对照孔中，注意不同对照的吸头需要更换。分别将50μL的被检血清或血浆样品加入到剩下的检测孔中，注意每个样本都使用不同吸头。轻弹微量反应板或用振荡器振荡，将反应板中的溶液混匀。 样品的孵育在室温下(18～25)℃孵育2小时或过夜孵育(12～18)小时。无论选择哪种孵育方式，都要将微量反应板用封条封闭或于湿箱中室温孵育，避免液体挥发。 洗板：用近300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体。在加入下一个试剂前，避免孔壁变干。酶标抗体的加入：在每个反应孔中加入100μL抗CSFV 酶标抗体。酶标抗体孵育：用封条封闭反应板或湿盒中室温下孵育30min。 重复洗涤。加入底物：每个孔中加入100μL的底物溶液。 底物孵育：于暗处、室温条件下孵育10min。计时从加入第一孔时，开始计时。终止反应：在第10min时每个反应孔中加入100μL的终止液终止反应。加入顺序同底物的加入顺序。读板：450nm处测定样本以及对照的吸光度值，也可用双波长(450nm和650nm)测定样本以及对照的吸光度值，空气调零。 计算结果≤30％阴性，30% -40％可疑，≥40%阳性。有效期到用户手上有效期应≥6个月。（二）、合同包4品目号4-2：禽白血病病毒抗体检测ELISA规格(96孔╳5板)/盒用途检测鸡血清中禽白血病病毒(A亚群和B亚群)抗体。试剂构成ALV包被板：5块；ALV阳性对照，稀释的鸡抗ALV抗体，叠氮钠防腐：1.9mL；阴性对照，稀释的无ALV 抗体鸡血清，叠氮钠防腐：1.9mL；IDEXX辣根过氧化物酶标记的(羊抗)鸡抗体，庆大霉素防腐：50mL 样品稀释缓冲液，叠氮钠防腐：235mL；TMB底物液：60mL；终止液：60mL。样品的处理 检测之前要用样品稀释液将被检样品进行500倍稀释(如：1μL的样品可以用样品稀释液稀释倒500μL)。注意不能稀释对照。不同的样品要注意换吸头。将样品加入检测板前要将样品充分混匀。 操作步骤 1)在试剂恢复到室温后，并将其振摇混匀再进行使用。2)取出抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置。3)取100μL未稀释的阴性对照液加入A1孔和A2孔中。4)取100μL未稀释的阳性对照液加入A3孔和A4孔中。5)取100μL稀释的被检样品液加入相应的孔中。所有被检样品都应进行双孔测定。6)室温下孵育30 min。7)每孔加约350μL的蒸馏水或去离子水进行洗板，洗3～5次。8)每孔加100μL的酶标羊抗鸡抗体。9)室温下孵育30 min。10)重复洗板。11)每孔加100μL的TMB底物液。12)室温下孵育15 min。13)每孔加100μL的终止液。14)酶联检测仪空气调零。15)测定各孔于650nm波长的吸光值(A650)。结果 只有阳性对照平均值和阴性对照平均值的差值大于 0.075，阴性对照平均值小于或等于0.150，该检测结果才能有效。检测样品中是否含有禽白血病病毒的抗体主要由该样的测定值与阳性对照平均值的比值决定。阳性对照已进行标准化处理，含有显著水平的抗禽白血病病毒抗体。被检样品的抗体水平主要由其测定值与阳性对照测定值的比值(S/P)确定。抗体滴度按下列方程式进行计算。 结果判定 S/P比值小于或等于0.4，判为阴性。S/P值大于 0.4(抗体滴度大于844) ，判为阳性，表明该动物已进行了免疫或感染了禽白血病病毒(A 亚群或B亚群) 。 计算方法阴性对照平均值(NCX)：[A1(A650) A2(A650)]/2=NCX 阳性对照平均值(PCX)：[ A3(A650) A4(A650)]/2=PCX S/P比值：(样品平均值-NCX)/(PCX-NCX)= S/P 1:500稀释样品S/P 比值与其抗体滴度的关系：Log10 抗体滴度=1.09(Log10S/P) 3.36有效期到用户手上有效期应≥6个月。（三）、合同包4品目号4-3：禽白血病病毒-J亚群抗体检测试剂盒用途检测鸡血清中禽白血病病毒J-亚群抗体。试剂ALV-J gp85包被板：5块；ALV-J阳性对照，稀释的鸡抗ALV-J抗体，叠氮钠防腐：1.9mL；阴性对照，稀释的无ALV-J抗体鸡血清，叠氮钠防腐：1.9mL；IDEXX辣根过氧化物酶标记的(羊)抗鸡抗体，庆大霉素防腐：50mL；样品稀释液；蛋白质缓冲液，叠氮钠防腐：235mL；TMB底物液：60mL；终止液：60mL；PBS-tween (10倍)的磷酸/吐温洗涤液：235mL。样品准备检测之前要用样品稀释液将被检样品进行500倍稀释(如：1μL的样品可以用样品稀释液稀释到500μL)。注意不要稀释对照。不同的样品要注意换吸头。在将样品加入检测板前要将样品充分混匀。洗涤液制备：(10X)浓缩的洗涤液在使用前必须用蒸馏水或去离子水进行 10 倍稀释。注意：如果浓缩液中含有结晶，在使用前必须将它融化。(如：30mL的浓缩洗涤液和270mL的蒸馏水或去离子水充分混合配成)。操作步骤1)将试剂恢复至室温，并将其振摇混匀后进行使用。2)抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置。3)取100μL不需稀释的阴性对照液加入A1孔和A2孔中。4)取100μL不需稀释的阳性对照液加入A3孔和A4孔中。5)取100μL稀释的被检样品液加入相应的孔中。所有被检样品都应进行双孔测定。 6)室温下孵育30 min。7)每孔加约350μL的蒸馏水或去离子水进行洗板，洗3～5次。8)每孔加100μL的酶标羊抗鸡抗体(HRPO)。9)室温下孵育30 min。10)每孔加约350μL的蒸馏水或去离子水进行洗板，洗3～5次。11)每孔加100μL的TMB底物液。12)室温下孵育15 min。13)每孔加100μL 的终止液。14)酶标仪空气调零。15)测定并记录各孔于650nm 波长的吸光值(A650)。试验有效性只有阳性对照平均值和阴性对照平均值的差值大于0.10，阴性对照平均值小于或等于0.150，该检测结果才能有效。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，试验应重做，并应全面地仔细核对各组分。检测样品中是否含有禽白血病病毒J-亚群(ALV-J)的抗体主要由该样的测定值与阳性对照平均值的比值决定。阳性对照已进行标准化处理，含有显著水平的抗禽白血病病毒J-亚群抗体。被检样品的抗体水平主要由其测定值与阳性对照测定值的比值(S/P)确定。抗体滴度按下列方程式进行计算。 结果判定S/P比值小于或等于0.6，判为阴性。 S/P值大于0.6，判为阳性，表明禽白血病病毒J-亚群(ALV-J)的抗体存在。 结果分析本试验设计用于鸡血清中禽白血病病毒J-亚群(ALV-J)抗体检测。本试验适用于检测病毒水平感染的群体普查工具。 禽白血病病毒J-亚群(ALV-J)抗体反应在不同品种(鸡)中有差异性(内源性淋巴白血病病毒可能影响起反应) 。肉用型鸡禽白血病病毒J-亚群(ALV-J)抗体检测不建议用于12～14周龄以下的鸡群。 阳性抗体检测结果表明曾感染过ALV-J，但并不能反映是否散播病毒。检测鸡群ALV-J 状态的试验程序应该包括病毒血症和/或病毒携带试验。 ALV-J 垂直传递可导致子代免疫耐受，抗体检测表现为阴性。 计算方法阴性对照平均值(NC)：NC=A1(A650) A2(A650)/ 2阳性对照平均值(PC)：PC=A3(A650) A4(A650)/2S/P比值： S/P=样品平均值-NC/(PC -NC)有效期到用户手上有效期应≥6个月。（四）、合同包4品目号4-4：禽白血病病毒抗原检测ELISA规格(96孔╳5板)/盒用途检测鸡血清中禽白血病病毒抗原。试剂构成ALV包被板：5块；ALV阳性对照，稀释的鸡抗ALV抗体，叠氮钠防腐：1.9mL；阴性对照，稀释的无ALV 抗体鸡血清，叠氮钠防腐：1.9mL；IDEXX辣根过氧化物酶标记的(羊抗)鸡抗体，庆大霉素防腐：50mL 样品稀释缓冲液，叠氮钠防腐：235mL；TMB底物液：60mL；终止液：60mL。样品的处理 检测之前要用样品稀释液将被检样品进行500倍稀释(如：1μL的样品可以用样品稀释液稀释倒500μL)。注意不能稀释对照。不同的样品要注意换吸头。将样品加入检测板前要将样品充分混匀。 操作步骤 16)在试剂恢复到室温后，并将其振摇混匀再进行使用。17)取出抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置。18)取100μL未稀释的阴性对照液加入A1孔和A2孔中。19)取100μL未稀释的阳性对照液加入A3孔和A4孔中。20)取100μL稀释的被检样品液加入相应的孔中。所有被检样品都应进行双孔测定。21)室温下孵育30 min。22)每孔加约350μL的蒸馏水或去离子水进行洗板，洗3～5次。23)每孔加100μL的酶标羊抗鸡抗体。24)室温下孵育30 min。25)重复洗板。26)每孔加100μL的TMB底物液。27)室温下孵育15 min。28)每孔加100μL的终止液。29)酶联检测仪空气调零。30)测定各孔于650nm波长的吸光值(A650)。结果 只有阳性对照平均值和阴性对照平均值的差值大于 0.075，阴性对照平均值小于或等于0.150，该检测结果才能有效。检测样品中是否含有禽白血病病毒的抗体主要由该样的测定值与阳性对照平均值的比值决定。阳性对照已进行标准化处理，含有显著水平的抗禽白血病病毒抗体。被检样品的抗体水平主要由其测定值与阳性对照测定值的比值(S/P)确定。抗体滴度按下列方程式进行计算。 *结果判定 S/P比值小于或等于0.4，判为阴性。S/P值大于 0.4(抗体滴度大于844) ，判为阳性，表明该动物已进行了免疫或感染了禽白血病病毒(A 亚群或B亚群) 。 计算方法阴性对照平均值(NCX)：[A1(A650) A2(A650)]/2=NCX 阳性对照平均值(PCX)：[ A3(A650) A4(A650)]/2=PCX S/P比值：(样品平均值-NCX)/(PCX-NCX)= S/P 1:500稀释样品S/P 比值与其抗体滴度的关系：Log10 抗体滴度=1.09(Log10S/P) 3.36有效期到用户手上有效期应≥6个月。（五）、合同包4品目号4-5：禽网状内皮组织增殖症病毒抗体检测试剂盒 用途检测鸡血清中网状内皮组织增殖症病毒(REV)抗体的酶联免疫检测试盒。 试剂REV包被板：5块；REV阳性对照血清：含REV 抗体，已经稀释，用叠氮化钠保护1.9mL；REV阴性对照血清：不含REV抗体，已经稀释，用叠氮化钠保护1.9mL；酶标抗体，(山羊)抗鸡抗体-辣根过氧化物酶(HRPO)结合物50mL 样品稀释液，用叠氮化钠保护：235mL；TMB底物：60mL；终止液：60mL。样品准备在检测前用样品稀释液将样品作500倍稀释(如：1μL 500μL或三步稀释法：1：90μL 10μL；2：90μL 10μL；3：120μL 30μL)注意不要稀释对照血清。每个样品都要换一个滴头，样品加入抗原包被孔之前要充分混合均匀。 操作步骤1)各组分放置至室温(20-25℃)，颠倒摇动混合均匀。2)取出包被板，在表上记录样品位置。3)加100 μL不需稀释的阴性对照血清至A1和A2孔。4)加100μL不需稀释的阳性对照血清至A3和A4孔。5)加100μL稀释好的样品至相应的孔。6)在室温孵育30min。7)用大约350μL蒸馏水或去离子水洗涤微孔3～5次。 8)每孔加入100μL酶标羊抗鸡抗体(HRPO)。9)在室温孵育30min。10)重复洗涤。11)每孔加100μL TMB底物溶液。 12)在室温下孵育15min。 13)每孔加100μL终止液终止反应。 14)在空气中读空白数。 15)在650nm，A(650)测量和记录吸光值。 试验有效性只有在阳性对照孔所得的均值减去阴性对照孔所得值的均值(PCX-NCX)大于 0.075时，阴性对照孔所得值的均值小于或等于0.150时，测定结果才有效。REV抗体的存在与否由样品对阳性的S/P值来决定。阳性对照是标准化的，代表鸡血清的有效抗体水平。样品抗体的相对水平由样品对阳性的S/P比值来决定。终点滴度可以通过后面列出的关系式计算得出。 结果判定样品的S/P值小于或等于0.5，判为阴性。 样品的S/P值大于0.5(滴度大于1076)，判为阳性。 计算方法阴性对照平均值(NCX)：A1孔(650)A2孔(650)/2 =NCX阳性对照平均值(PCX)：A3孔(650)A4孔(650)/2=PCXS/P值：样品(650)-NCX(650)/PCX-NCX=S/P 与S/P 的关系式：Log 滴度=1.09(LogS/P) 3.36有效期到用户手上有效期应≥6个月。（六）、合同包4品目号4-6：禽白病毒性关节炎抗体抗体检测ELISA规格(96孔╳5板)/盒用途检测病毒性关节炎抗体抗体。试剂构成病毒性关节炎抗体包被板：5块；病毒性关节炎抗体阳性对照，稀释的鸡抗病毒性关节炎抗体抗体，叠氮钠防腐：1.9mL；阴性对照，稀释的无病毒性关节炎抗体抗体鸡血清，叠氮钠防腐：1.9mL；IDEXX辣根过氧化物酶标记的(羊抗)鸡抗体，庆大霉素防腐：50mL 样品稀释缓冲液，叠氮钠防腐：235mL；TMB底物液：60mL；终止液：60mL。样品的处理 检测之前要用样品稀释液将被检样品进行500倍稀释(如：1μL的样品可以用样品稀释液稀释倒500μL)。注意不能稀释对照。不同的样品要注意换吸头。将样品加入检测板前要将样品充分混匀。 操作步骤 1)在试剂恢复到室温后，并将其振摇混匀再进行使用。2)取出抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置。3)取100μL未稀释的阴性对照液加入A1孔和A2孔中。4)取100μL未稀释的阳性对照液加入A3孔和A4孔中。5)取100μL稀释的被检样品液加入相应的孔中。所有被检样品都应进行双孔测定。6)室温下孵育30 min。7)每孔加约350μL的蒸馏水或去离子水进行洗板，洗3～5次。8)每孔加100μL的酶标羊抗鸡抗体。9)室温下孵育30 min。10)重复洗板。11)每孔加100μL的TMB底物液。12)室温下孵育15 min。13)每孔加100μL的终止液。14)酶联检测仪空气调零。15)测定各孔于650nm波长的吸光值(A650)。结果 只有阳性对照平均值和阴性对照平均值的差值大于 0.075，阴性对照平均值小于或等于0.150，该检测结果才能有效。检测样品中是否含有禽白血病病毒的抗体主要由该样的测定值与阳性对照平均值的比值决定。阳性对照已进行标准化处理，含有显著水平的抗禽白血病病毒抗体。被检样品的抗体水平主要由其测定值与阳性对照测定值的比值(S/P)确定。抗体滴度按下列方程式进行计算。 结果判定 S/P比值小于或等于0.4，判为阴性。S/P值大于 0.4(抗体滴度大于844) ，判为阳性，表明该动物已进行了免疫或感染了病毒性关节炎抗体。 计算方法阴性对照平均值(NCX)：[A1(A650) A2(A650)]/2=NCX 阳性对照平均值(PCX)：[ A3(A650) A4(A650)]/2=PCX S/P比值：(样品平均值-NCX)/(PCX-NCX)= S/P 1:500稀释样品S/P 比值与其抗体滴度的关系：Log10 抗体滴度=1.09(Log10S/P) 3.36有效期到用户手上有效期应≥6个月（七）、合同包4品目号4-7：鸡贫血病病毒抗体检测试剂盒用途检测鸡血清中鸡贫血病病毒抗体的酶联免疫检测试剂。试剂禽鸡贫血病病毒包被板：5块；抗CAV单克隆抗体：(HRPO)酶标记物，含蛋白稳定剂的缓冲液：50mL；CAV阴性对照，稀释的无鸡贫血病病毒抗体鸡血清，叠氮钠防腐：2mL；CAV阳性对照，稀释的鸡抗CAV抗体，叠氮钠防腐：2 mL；样品稀释缓冲液，叠氮钠防腐：235 mL；10倍浓缩洗涤液：磷酸缓冲液，庆大霉素防腐：235 mL；TMB底物液：60 mL；终止液：60 mL。样品准备为了孵育时间的标准化，样品应先在96孔稀释管中稀释，这样才可能用多道移液器快速加样。不同的样品要注意换吸头。样品加入酶联反应检测板前要将样品充分混匀。不要稀释对照。A.野外感染用于快速检测以确定野外感染CAV。用样品稀释液(Sample Dilusion)以10倍的比例分别稀释要检的血清样品(如：10μL样品就需要加90μL样品稀释液(Sample Dilusion)。B.疫苗免疫用于监测升高的抗体水平(如CAV疫苗免疫后)。用样品稀释液(Sample Dilusion)以100倍的比例分别稀释要检的血清样品(如：10μL样品就需要加990μL样品稀释液(Sample Dilusion)。用这个稀释度能显著区别免疫抗体效价。疫苗免疫反应因疫苗剂量，注射方法，鸡只年龄等而不同。洗涤液制备：10倍浓缩的洗涤液(Wash Concentrate)在使用前必须恢复至室温(18-25)℃，使用时要振荡使 析出的盐溶解并用蒸馏水或去离子水进行10倍稀释(如：30mL的浓缩洗涤液要加270mL的水并充分混匀)。操作步骤1)首先将试剂恢复到室温(18-25)℃并将其振摇混匀后再进行检测。2)取出抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置。3)将100μL不需稀释的阴性对照加入A1孔和B1孔中。4)将100μL不需稀释的阳性对照加入C1孔和D1孔中。5)将100μL稀释的被检样品加入相应的孔。所有被检样品既可采用双孔测定又可采用单孔测定。6)室温(18～25)℃孵育60min。7)每孔加约350μL的稀释好的洗涤液进行洗板，共洗涤3-5次。8)每孔加100μL的抗CAV的酶标记抗体(HRPO Conjugate)。9)室温(18～25)℃下孵育30min。10)重复洗涤。11)每孔加100μL的底物液(TMB Substrate)。室温(18～25)℃下孵育15min。12)每孔加100μL的反应终止液(Stop Solution)。13)酶标仪空气调零，测定各孔于650nm波长处的吸光值A(650)。结果只有阴性对照光密度(650nm)平均值大于或等于0.600，阳性对照S/N值要小于或等于0.50，该检测结果才能有效。若实验结果失败，有可能是实验操作失误造成，应按操作说明进行重复实验。被检样品的鸡贫血病病毒(CAV)抗体是否存在主要由其测定值与阴性对照测定值的比值 (S/N)确定。结果判定1：10稀释S/N值大于0.6，判为阴性。S/N值小于或等于0.6，判为阳性。1：100稀释疫苗免疫后鸡群的免疫状态应通过监测并记录其代表性样本在一段疫苗起效时间内的抗体水平来评 估。根据结果可以评估抗体水平的分布及分析鸡群免疫状态的改变。计算方法阴性对照平均值(NCX)：(A1孔(A650) B1孔(A650))/2=NCX阳性对照平均值(PCX)：(C1孔(A650) D1孔(A650))/2=PCXS/N比值：样品平均值(A650)/NCX=S/N有效期到用户手上有效期应≥6个月。三、服务要求1、包装1.1包装：货物交货时应按国家有关标准要求进行包装。1.2 包装必须与运输方式相适应，包装方式的确定及包装费用均由中标人负责；由于不适当的包装而造成货物在运输过程中有任何损坏由中标人负责。1.3包装应足以承受整个过程中的运输、转运、装卸、储存等，充分考虑到运输途中的各种情况（如暴露于恶劣气候等）和福建地区的气候特点。2、配送2.1.所有试剂由中标人直接运输到采购人指定的仓库，送货前应提前通知采购人的相关部门，以便安排。2.2.运输所需费用(含保险金等)由中标人负担。2.3.发送试剂之前，中标人要向采购人提供发货时间表。2.4.中标人应按采购人的采购计划及时组织供货,不得影响正常使用。3、验收3.1中标人负责将货物按签订合同的具体数量、具体地点运送到现场。3.2采购人应逐件认真核对商品包装上印制的产品名称，包括生产企业、规格、有效期，并清点数量，确认所提供货物与投标文件相符，验收结果经双方确认后，双方代表必须按规定的验收交接单上的项目对照本合同填好验收结果并签名盖章。3.3试剂验收实行整批订单验收制度，该批次订单中单一产品验收不合格视为整批试剂验收不合格。若验收不能符合要求，采购人将按合同条款的有关规定执行。3.4在采购人现场进行检验所产生的一切费用由中标人承担。四、质量保证及售后服务要求1、如产品使用过程中确因产品质量引发的投诉问题和损失，由中标人负责处理和赔偿。2、中标人须承诺均在货物外包装上注明货物质保期。3、中标人所提供的货物经初步外包装验收合格后，在开箱使用过程中发现试剂残缺、污损或其他问题时，中标人在接到采购人不合格通知后2小时内应在委派专业技术人员现场查看，并查找原因。同时应在48小时内先提供同型号、同规格的试剂，其中发生一切费用由中标人承担。如开箱后在使用过程发生疑问，乙方在接到中标人不合格通知后1小时内应委派专业技术人员免费提供电话技术咨询、指导等服务。质量保证期内中标人有责任对试剂使用情况进行不定期的巡查。4、投标人应响应本次招标售后服务要求并在投标文件中提供详细具体的售后服务条件及保证，也可视自身能力在投标文件中提供更优、更合理的服务承诺。五、培训要求中标人所提供的培训和技术指导应贯穿在试剂使用的过程中，按采购单位要求对使用人员单独进行培训，主要以面授为主，电话指导为辅。必要时到现场对照产品跟受训人员讲解产品结构性能，使用户能全面掌握产品的使用操作；同时也可以按照使用单位的要求举行集中培训。六、其他要求：1、中标人应在合同规定的时间内交货，经验收合格后交付采购人使用。2、本项目不允许投标人以任何名义和理由进行转包或分包，如有发现，采购人有权单方中止合同，且中标人必须赔偿由此给采购人带来的一切损失。3、采购人在授予合同时有权对本次采购货物的数量和服务增加或减少。4、招标文件要求所发生的一切费用均包含在投标总价中。5、投标人应根据招标文件的技术要求条款，在投标文件中详细说明所提供产品的品牌、型号、生产厂家、技术规格和参数、产地。七、中标人应在中标通知书发出之日起30个日历日内与采购人签订采购合同。八、投标人必须由法定代表人或法定代表人正式授权的投标人代表参加开标会，随时接受评委询问，并予以解答。第四章 试剂盒购销合同（范本）注释： 《试剂购销合同格式》，本格式条款仅作为双方签订合同的参考，为阐明各方的权利和义务，经协商可增加新的条款。 但不得与招标文件、投标文件的实质性内容相背离。合同号：甲方（采购人）：福建省动物疫病预防控制中心， 签订地点：福州乙方（中标人）： 签订日期：年月 日根据甲方委托( )对进行招标采购（招标编号： ）的招标结果，乙方为中标人，现依照招标文件、投标文件及相关文件的内容，双方达成如下协议：1、合同标的合同价格产品名称规格型号生产厂家数量单价数 量单 价总 价 交货期 国产10天兰州所20天进口20天合同总金额【合同总金额包括货物、技术资料、技术培训服务、运输（至项目县域内指定地点）、质量检验、售后服务所必须的全部费用（含保险扩税费）。】：人民币（大写）（￥：）建议将合同总金额部份与付款方式并在一起，将下面的注释内容放进此框架内（本次采购为年度采购，各合同包试剂数量只作参考；具体各合同包采购数量以中标方签订合同后采购人通知为准。）2、交货方式和交货地点2.1交货方式：由乙方负责运送到甲方指定交货地点2.2交货地点：福建省动物疫病预防控制中心指定地点3、付款方式与条件3.1货物交货付款本次招标全部货物将按照采购人要求分批发货，以邮件订单为准。单批货物交货并经双方验收合格2个月后或货物全部使用完毕后，甲方凭收讫货物的验收凭证和货物验收合格文件等材料以转账方式向乙方一次性支付该批货物100%的货物价款。收款银行信息如下：户名： 开户行： 账号： 现场交货条件下，乙方要求付款应提交下列单证和文件。a.金额为有关合同货物价格的正式普通发票。b.该试剂在相应区域的代理授权证明（如果有需提供）。 C.发货清单（含发货单位公章）。4、质量要求和技术标准符合生产企业的标准，并按投标文件相应条款验收。5、验收、技术服务、人员培训及技术资料需方应逐件认真核对商品包装上印制的产品名称，包括生产企业、规格、有效期，并清点数量，确认所提供货物与投标文件相符，验收结果经双方确认后，双方代表必须按规定的验收交接单上的项目对照本合同填好验收结果并签名盖章。乙方所提供的培训和技术指导应贯穿在试剂使用的过程中的，按采购单位要求对使用人员单独进行培训，主要以面授为主，电话指导为辅。必要时到现场对照产品跟受训人员讲解产品结构性能，使用户能全面掌握产品的使用操作；同时也可以按照使用单位的要求举行集中培训。试剂验收实行整批订单验收制度，该批次订单中单一产品验收不合格视为整批试剂验收不合格。6、质量保证如产品使用过程中确因产品质量引发的投诉问题和损失，由乙方负责处理和赔偿。乙方承诺均在货物外包装上注明货物质保期。乙方所提供的货物经初步外包装验收合格后，在开箱使用过程中发现试剂残缺、污损或其他问题时，乙方在接到甲方不合格通知后2小时内应在委派专业技术人员现场查看，并查找原因。同时应在48小时内先提供同型号、同规格的试剂，其中发生一切费用由乙方承担。如开箱后在使用过程发生疑问，乙方在接到甲方不合格通知后1小时内应委派专业技术人员免费提供电话技术咨询、指导等服务。质量保证期内乙方有责任对试剂使用情况进行不定期的巡查检修。投标人视自身能力在投标文件中提供更优、更合理的维修服务承诺。7、知识产权：乙方须保障甲方在使用该货物或其任何一部分时不受到第三方关于侵犯专利权、商标权或工业设计权等知识产权的指控。如果任何第三方提出侵权指控与甲方无关，乙方须与第三方交涉并承担可能发生的责任与一切费用。如甲方因此而遭致损失的，乙方应赔偿该损失。8、违约责任8.1 未按期交货的违约责任8.1.1 如果乙方未能按合同规定的时间按时足额交货的（不可抗力除外），甲方有权选择同意延长交货期还是不予延长交货期。如甲方同意延长交货期的，延期交货的时间由双方另行确定，但延期交货时间最长不超过5天。延期交货违约金的支付甲方有权从未付的合同货款中扣除。延期交货违约金比率为每迟交1 天，按迟交货物所在订单总金额的3％支付违约金。8.1.2 如果乙方未能按合同规定的时间或双方另行确定的延期交货期按时足额交货的（不可抗力除外），每逾期1天，乙方应按迟交货物所在订单总金额的3％向甲方支付逾期交货的违约金。逾期交货违约金的支付甲方有权从未付的合同货款中予以扣除。若乙方逾期交货达15天（含15天）以上的，将视为乙方违约，甲方有权单方解除本合同，乙方仍应按上述约定支付延期交货违约金。若因此给甲方造成损失的，还应赔偿甲方所受的损失。8.1.3 乙方未按期交货均应向甲方提交正式的书面致歉函，并对原因进行详细说明。8.2 交货质量不合格的违约责任如果乙方在供货期内或双方另行确定的延期交货期内提供的货物无法响应投标文件，将视为验收不合格，甲方将予以退货。乙方必须在合同约定的时间内重新供货，直至验收合格。乙方如果在合同规定的期限内或双方另行确定的延期交货期内仍无法提供合格货物，甲方将按8.1.2条款进行处罚。8.3 未按时提供技术服务的违约责任8.3.1 如果乙方未按照合同条款6规定的时间技术服务，将视为乙方违约，甲方将按该批货物金额的3％的金额进行处罚。8.3.2 如果乙方因货物问题无法在48小时内先提供同型号、同规格的试剂供甲方使用，将视为乙方违约，甲方将按该批货物金额的3％的金额进行处罚。若甲方逾期未付款（有正当理由的除外），甲方应当承担逾期未付款的违约责任。9、违约终止合同9.1 在补救违约而采取的任何其他措施未能实现的情况下，即在甲方发出的违约通知后10天内（或经甲方书面确认的更长时间内）仍未纠正其下述任何一种违约行为，甲方有权向乙方发出书面违约通知，甲方终止本合同：9.1.1 乙方未能在合同规定的期限内或双方另行确定的延期交货时间内交付合同约定的货物。9.1.2 乙方未能履行合同项下的任何其它义务。10、不可抗力因不可抗力造成违约的，遭受不可抗力一方应及时向对方通报不能履行或不能完全履行的理由，并在随后取得有关主管机关证明后的15日内向另一方提供不可抗力发生以及持续期间的充分证据。基于以上行为，允许遭受不可抗力一方延期履行、部分履行或者不履行合同，并根据情况可部分或全部免于承担违约责任。本合同中的不可抗力指不能预见、不能避免并不能克服的客观情况。包括但不限于：自然灾害如地震、台风、洪水、火灾；政府行为、法律规定或其适用的变化或者其他任何无法预见、避免或者控制的事件。11、合同纠纷处理方式：因本合同或与本合同有关的一切事项发生争议，由双方友好协商解决。协商不成的，任何一方均可选择以下方式解决：（1）向福州市人民法院申请诉讼；（2）向有管辖权的人民法院提起诉讼。12、其他约定12.1本采购项目的招标文件、我司投标文件以及相关的澄清确认函（如果有的话）均为本合同不可分割的一部分，与本合同具有同等法律效力。 12.2本合同未尽事宜，双方另行补充。 12.3本合同一式四份，经双方授权代表签字并盖章后生效。甲方、乙方各执一份，相关部门各执一份，具有同等效力。甲方：福建省动物疫病预防控制中心乙方： 单位地址：单位地址：法定代表人：法定代表人：委托代理人：委托代理人：电话： ******** 电话： 开户银行：开户银行：账号：账号：经 办 人：订单邮箱：账号：订单电话：第五章投标文件格式注:1、本附件格式分第一册“技术商务标格式”和第二册“报价标格式”两册,装订时要求第一册和第二册均须单独装订。2、附件格式仅供制作投标文件时参考,投标人应根据行业特点,结合本次招标技术规格要求,对有关表格进行补充或修改,但不得对实质性文件的相关条款作出变动。3、所有资格证明文件复印件须注明“与原件一致”并加盖投标人公章，否则按无效标处理。货物和服务项目投标文件第一册 技术商务标招标编号：项目名称：合 同 包：投标人名称（并盖公章）： 日 期： 2014年 月日联系电话： 技术商务标格式目录1. 货物说明一览表（格式1） 2. 供货范围清单 （格式2）3. 技术规格偏离表（格式3）4. 商务偏离表（格式4）5. 售后服务承诺函（格式5）6. 投标人的资格证明文件（格式6）关于资格的声明函（格式6-1）投标人的资格声明（格式6-2）法定代表人授权书（格式6-3） 法人营业执照、税务登记证（格式6-5）7.投标货物均必须具有相应的证明文件（格式7）8．投标人提交的其他资料（如硬件彩页等）（格式8）9．投标保证金复印件（格式9）货物说明一览表(格式1) （按投标货物合同包下序号类别分别填写）投标人名称:招标编号∶合同包号货物名称品牌数量原产地及制造商名称型号规格详细性能说明投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 供货范围清单(格式2)说明：本清单应列明组成货物的主要件和关键件的名称、数量、原产地；投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 技术规格偏离表(格式3)投标人名称：招标编号∶合同包/品目号货物名称规格条目号招标文件要求投标响应偏离说明有关内容须在投标文件中标明具体页码注：投标人应如实详细填写技术规格偏离表，应将技术参数逐条详细列在偏离表中，不得只简单列出规格型号，也不得在“投标响应”栏中仅出现“响应”字样，否则评标委员会将做出不利于投标人的判断。投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 商务偏离表(格式4)投标人名称：招标编号∶招标文件要求投标响应偏离说明有关内容须在投标文件中标明具体页码注：投标人提交的投标文件中与招标文件的商务部分的要求有不同时，应逐条列在偏离表中，否则评标委员会将做出不利于投标人的判断。本表中投标响应具体内容应明确标注出在投标文件中的具体页码。投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 售后服务承诺函(格式5)(投标人根据招标文件对售后服务的要求结合自身情况进行承诺)投标人代表签名：投标人（全称并加盖公章）： 投标人的资格证明文件关于资格的声明函(格式6) 福建省智信招标有限公司 ：关于贵方 年月日第（招标编号）投标邀请，本签名人愿意参加投标，提供招标文件“招标货物一览表”中规定的（合同包） （货物名称），并证明提交的下列文件和说明是准确的和真实的。 1．本签名人确认资格文件中的说明以及投标文件中所有提交的文件和材料是真实的、准确的。2．我方的资格声明正本一份，副本五份，随投标文件一同递交。 投标人代表签名：投标人（全称并加盖公章）： 投标人的资格声明 (格式6-1)1．投标人概况：Ａ．投标人名称：Ｂ．注册地址：传真： 电话： 邮编：Ｃ．成立或注册日期：Ｄ．法人代表： （姓名、职务）实收资本：其中 国家资本：法人资本：个人资本：外商资本： Ｅ．最近资产负债表（到 年 月日为止）。(1)固定资产合计: (2)流动资产合计: (3)长期负债合计: (4)流动负债合计: Ｆ．最近损益表（到 年 月日为止）。(1)本年（期）利润总额累计：(2)本年（期）净利润累计：2．我方在此声明，我方具备并满足下列各项条款的规定。本声明如有虚假或不实之处，我方将失去合格投标人资格且我方的投标保证金将不予退还。（1）具有独立承担民事责任的能力； 　　（2）具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度； 　　（3）具有履行合同所必需的设备和专业技术能力； 　　（4）有依法缴纳税收和社会保障资金的良好记录； 　　（5）近三年内，在经营活动中没有重大违法记录；3．最近三年投标货物在国内主要用户的名称和地址：用户名称和地址销售货物名称、规格数量交货日期运行状况 4. 法人营业执照、税务登记证。就我方全部所知，兹证明上述声明是真实、正确的，并已提供了全部现有资料和数据，我方同意根据贵方要求出示文件予以证实。 投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）：日期： 年月日电传：传真：电话：法定代表人授权书(格式6-2)福建省智信招标有限公司：（投标人全称）法定代表人 授权（投标人代表姓名）为投标人代表，代表本公司参加贵司组织的项目（招标编号 ）招标活动，全权代表本公司处理投标过程的一切事宜，包括但不限于：投标、参与开标、谈判、签约等。投标人代表在投标过程中所签署的一切文件和处理与之有关的一切事务，本公司均予以认可并对此承担责任。投标人代表无转委权。特此授权。本授权书自出具之日起生效。投标人代表：性别： 身份证号：单位：部门： 职务：详细通讯地址：邮政编码:电话：附：被授权人与授权人身份证复印件（正反两面均需提供）授权方投标人（全称并加盖公章）： 法定代表人签名或签章： 日 期：接受授权方 投标人代表签名：日 期： 法人营业执照、税务登记证(格式6-3)福建省智信招标有限公司：现附上由 （签发机关名称）签发的我方法人营业执照正、副本复印件，该执照业经年检，真实有效。现附上由 （签发机关名称）签发的我方税务登记证副本复印件，该证件已经年检，真实有效。（注：法人营业执照、税务登记证提供复印件，需复印包括能说明经年检合格的内容，由企业加盖公章并注明复印件与原件一致。）投标人代表签名：投 标 人（全称并加盖公章）： 投标货物均必须具有相应的证明文件(格式7)（如：产品检验报告、产品检测报告、产品鉴定证书等）投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： ?投标人提交的其它资料(格式8) 投标人认为应提交的其他材料，（如彩页等）等可在此附件中提交。投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 投标保证金复印件(格式9)投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 货物和服务项目投标文件第二册报价标招标编号：项目名称：合 同 包：投标人名称（并盖公章）：日 期： 2014年 月日联系电话：第二册：报价标格式目录（1）投标书(格式1)（2）开标一览表(格式2)（3）中小企业声明函(格式3)（4）由企业所在地的县级以上中小企业主管部门出具的属于小型、微型企业制造的产品证明文件(格式4)(5) 投标分项报价表(格式5)(6) 退还投标保证金函(格式6)投 标 书(格式1)致：福建省智信招标有限公司根据贵方为项目的投标邀请（招标编号）： ，本签名代表（全名、职务）正式被授权并代表投标人（投标人名称、地址）提交下述文件正本一份和副本五份。（一）第一册技术商务标1. 货物说明一览表 2. 供货范围清单 3. 技术规格偏离表4. 商务偏离表5. 售后服务承诺函6. 投标人的资格证明文件 关于资格的声明函 投标人的资格声明 法定代表人授权书法人营业执照、税务登记证7.投标货物均必须具有相应的证明文件8．投标人提交的其他资料（如硬件彩页等）9．投标保证金复印件（二）第二册报价标1.投标书2.开标一览表3.中小企业声明函4.由企业所在地的县级以上中小企业主管部门出具的属于小型、微型企业制造的产品证明文件5.投标分项报价表6.退还投标保证金函7．以 方式提供的金额为人民币 元的投标保证金。据此函，签名代表宣布同意如下：（1）所附详细报价表中规定的应提供和交付的货物及服务报价总价（国内现场交货价）为人民币，即 （中文表述）。（2）投标人已详细审查全部招标文件，包括修改文件（如有的话）和有关附件，将自行承担因对全部招标文件理解不正确或误解而产生的相应后果。（3）投标人保证遵守招标文件的全部规定，投标人所提交的材料中所含的信息均为真实、准确、完整，且不具有任何误导性。（4）投标人将按招标文件的规定履行合同责任和义务。（5）本投标文件自开标日起投标有效期为：投标截止期结束后 60 日历日。（6）如果发生招标文件第二章投标人须知第12条所述情况，则同意招标代理机构不予退还投标保证金。（7）投标人同意提供按照招标采购单位可能要求的与其投标有关的一切数据或资料，完全理解贵方不一定要接受最低的报价或收到的任何投标。（8） 与本投标有关的一切正式往来通讯请寄：地址：邮编：电话：传真：投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）：日期： 年月日开标一览表(格式2)投标人名称： 招标编号∶货币单位：元合同包货物名称生产厂家及品牌型号数量单价(元)总价(元)投标总价￥ （ 元）付款条件响应完全按招标文件要求执行交货期及交货地点完全按招标文件要求执行投标保证金备注注：1.此表应再另册制作一套同装在一单独的信封内密封，并将此信封与投标书正本一同密封。2.详细报价清单应另纸详列，且标明所报各种货物的数量、生产厂家、品牌和金额。3.当一个合同包有多个品目号时，投标人应计算出该合同包的合计价。投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 　中小企业声明函(格式3)　　本公司郑重声明，根据《政府采购促进中小企业发展暂行办法》（财库[2011]181号）的规定，本公司为______（请填写：中型、小型、微型）企业。即，本公司同时满足以下条件：　　1.根据《工业和信息化部、国家统计局、国家发展和改革委员会、财政部关于印发中小企业划型标准规定的通知》（工信部联企业[2011]300号）规定的划分标准，本公司为______（请填写：中型、小型、微型）企业。　　2.本公司参加______单位的______项目采购活动提供本企业制造的货物，由本企业承担工程、提供服务，或者提供其他______（请填写：中型、小型、微型）企业制造的货物。本条所称货物不包括使用大型企业注册商标的货物。　　本公司对上述声明的真实性负责。如有虚假，将依法承担相应责任。投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 日期：年 月 日由企业所在地的县级以上中小企业主管部门出具的属于小型、微型企业制造的产品证明文件(格式4)由投标产品生产企业所在地的县级以上中小企业主管部门出具的属于小型、微型企业的证明文件。投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 日期：年 月 日投标分项报价表(格式5)投标人名称： 招标编号： 货币单位： 1投标货物合同包/品目号2货物名称3原产地4数量、型号、规格5试剂单价6技术服务费7包装费8检验培训费9运输费用10保险费用11投标总价注：1．第1栏投标货物合同包/品目号系指“招标货物一览表”中该货物的合同包。2．选购件价不包括在本报价表内，应另附纸分项单报。3．此表第11项投标价若与开标一览表有出入，以开标一览表投标价格为准。投标人代表签名： 投标人（全称并加盖公章）： 退还投标保证金函(格式6)致：福建省智信招标有限公司我司于年月 日参与贵司组织开标的项目编号为：ZFCG-2014-26的（项目名称：福建省动物疫病预防控制中心试剂采购）投标，我司于年月 日 以 (同城转帐、异城电汇)形式向贵司账户缴纳投标保证金（大写元）（小写￥元），当可退回时，请退回到我司以下账户：开户名： 开户行：账 号： 公司所在地：省 市 县 投标人代表： 联系电话：（手机） （固话）投标人名称（盖公司公章）：附：汇款凭证注意事项：1、以上内容应详细填写，不可简化；2、请在开标或谈判当天，将此表单独再另册制作一套与开标一览表或报价表一同单独装在信封内密封，并将此信封与投标书正本一同密封提交。3、未能及时缴交本表以及填写相关信息而致未能及时退还投标保证金的，福建省智信招标有限公司将不负法律与经济责任。