人参益元颗粒对化疗后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤体生长和免疫功能的影响测试加工服务
人参益元颗粒对化疗后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤体生长和免疫功能的影响测试加工服务
| 项目编号 | BA********* | 项目名称 | 人参益元颗粒对化疗后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤体生长和免疫功能的影响（测试加工服务） |
|---|---|---|---|
| 经办人单位 | 第一医院（白求恩第一临床医学院） | 经办人 | 吴荻 |
| 预算金额 | ******.00 人民币 | 成交金额 | ******.00 人民币 |
| 成交供应商 | 宝瑞金（吉林）生物科技有限公司 | 质保期 | 24 月 |
| 联系地址 | 吉林省-长春市-高新技术产业区宇光街399号 | 采购单位 | 吉林大学第一医院（白求恩第一临床医学院） |
| 付款方式 | 服务完毕验收合格后100%付款。 | ||
| 供应商联系手机 | 180*****234 | 服务时间 | 2024年05月09日 至 2024年05月11日 |
| 服务地址 | 吉林省-长春市-高新技术产业区宇光街399号 | ||
| 验收方式 | 以成交单为准，参考相关内容进行验收。验收程序以甲方职能部门规定为准。 | ||
| 售后服务要求 | （一）乙方不能按承诺提供服务或所提供的服务不符合成交单规定标准，甲方有权拒收。同时，乙方向甲方 支付成交单款总额5%的违约金。 （二）乙方逾期交付服务成果时，每逾1日乙方向甲方偿付成交单款总额3‰的滞纳金。逾期超过30天后，甲 方有权决定是否继续履行成交单。 | ||
| 采购材料 | 自主采购.jpg | ||
| 采购品目 | 其他医学研究与试验发展服务 | 名称 | 测试加工费 |
|---|---|---|---|
| 单位 | 项 | 数量 | 1 |
| 单价 | ￥123,000.00 | 总价 | ￥123,000.00 |
| 范围/服务内容及要求 | 附件一 服务范围/内容及要求 实验一 （一）研究内容 观察人参益元颗粒对 Lewis 荷瘤小鼠瘤体生长和免疫功能的影响。 成人每日 14g（小鼠：12.33*14g/60kg=2.88g/kg） （二）研究方法 1. 实验材料 1.1 实验细胞 实验细胞采用小鼠 Lewis 肺癌细胞细胞株。细胞株使用含 10%胎牛血清和 1% 青链霉素的高糖 DMEM 培养基，在 5%CO2、37℃条件下培养，稳定传代至 4-5 代 备用。 1.2 实验动物 实验动物购自于北京维通利华实验动物技术有限公司，采用 8 周龄 C57BL/6J 雌性小鼠，55 只，体重 18-20g。 2 实验方法 2.1 皮下接种 用 PBS 将 Lewis 细胞制备成细胞悬液，根据预实验调整细胞悬液浓度至指定 浓度（在 5×10 6 /mL 上下选择，需要根据预实验结果判定该批细胞株增殖活性）。 在超净台上操作，用 75%酒精消毒 C57BL/6 小鼠右腋窝部皮肤，准备细胞接 种注射前使用移液枪将预先配制好的细胞悬液充分吹散，用注射器吸取 Lewis 肺癌细胞细胞悬液 0.2mL，针头轻轻刺入皮下，推入肿瘤细胞悬液。 2.2 人参益元药液配制 本研究使用的人参益元颗粒由吉林省中医药科学院制剂室提供，药物组成： 黄人参、黄芪、佛手、白芍、鸡血藤、甘草，规格：每袋装 10g，一次 1 袋，一 日 1 次。称量 2.88g，蒸馏水定容至 10mL。 2.3 动物分组及干预 随机选取 10 只小鼠作为空白对照组，其余小鼠接种 Lewis 细胞，接种后 1 周，检查小鼠成瘤情况，用手指轻轻触摸小鼠右侧腋下皮肤，若接种成功则可触 及约黄豆粒大小的结节。选取造模成功的荷瘤小鼠 40 只，按体质量随机分为 4 组(每组 10 只)：中药组、顺铂组、中药联合顺铂组(中西药组)和模型组。从接 种后第 8 天开始，给予荷瘤小鼠相应药物干预： ①对照组：按 10mL/kg 每日灌服蒸馏水，连续灌胃 21 天，并从第 1 天开始 隔天腹腔注射生理盐水 0.4ml； ②模型组：按 10mL/kg 每日灌服蒸馏水，连续灌胃 21 天，并从第 1 天开始 隔天腹腔注射生理盐水 0.4ml； ③顺铂组：从第 1 天开始，隔天腹腔注射顺铂注射液 0.4ml(浓度 2mg/kg)， 共注射 10 次，同时按 10mL/kg 每日灌服蒸馏水 21 天； ④中药组：从第 1 天开始每日灌胃人参益元颗粒 10mL/kg，连续灌胃 21 天， 并隔天腹腔注射生理盐水 0.4ml，共注射 10 次； ⑤中西药组：按照人参益元颗粒 10mL/kg 每日连续灌胃 21 天，同时隔天腹 腔注射顺铂注射液 0.4ml,共 10 次。 3. 观测指标 3.1 一般观察和体重 每天检查小鼠的体重和一般情况，包括行为、皮毛状态、食物摄入量和排便 情况。 3.2 瘤体体积测量 分别于干预周期的第 1、4、7、10、14、20 天，用电子游标卡尺测量各组小 鼠皮下肿瘤的长径和短径，根据长径(a)和短径(b)来计算肿瘤体积，计算公式为： V(cm3)=ab2/2,以干预天数为横轴，小鼠肿瘤体积为纵轴，绘制各组小鼠的肿瘤 生长曲线。（每组 10 只） 3.3 肿瘤组织 HE 染色 将各组小鼠皮下移植瘤剥离后制成组织切片，采用ＨE 染色方法对肿瘤组织 进行染色，以观察其组织细胞形态。（每组三只，切片做全扫描） 3.4 计算抑瘤率 各组进行干预 21 天后脱颈椎处死小鼠，完整剥取小鼠右侧腋部肿瘤组织， 滤纸吸干瘤体表面后立即采用精密电子天平称取肿瘤质量，并进行瘤体拍照。根 据肿瘤质量计算各组抑瘤率，抑瘤率=(模型组平均瘤质量一药物干预组平均瘤质 量)/模型组平均瘤质量×100%。（每组 10 只） 3.5 外周血和淋巴细胞(PBMC)的测定 给药 21 天后，取小鼠眼窝静脉血样。用全自动血液分析仪检测白细胞(WBC)、 血小板(PLT)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)及淋巴细胞(PBMC)。（每组 5 只） 3.6 免疫器官指数 处死小鼠前先进行眼球采血，眼球采血后处死小鼠，尽量完整摘取胸腺及脾 脏，冲洗并用滤纸吸干水分后称重。胸腺及脾脏指数计算公式：胸腺指数=(胸腺 重量(mg)×1000)/小鼠体重(g)，脾脏指数=(脾脏重量(mg)×1000)/小鼠体重(g)。 （每组 10 只） 3.7 免疫相关指标检测 流式细胞仪检测脾脏中 CD4+、CD8+以及 CD4／CD8 水平；（每组 3 只） ELISA 法检测外周血和脾脏中相肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素－γ (IFN-γ) 含量。（每组 5 只） 费用： 测试加工费：***** 实验二 1、人参益元颗粒在小鼠体内对放化疗所致的免疫功能低下的拮抗作用 雄性 SD 大鼠 40 只，随机分为正常对照组、模型对照组及人参益元颗粒低、 中、高剂量干预组共 5 组，每组 8 只，称重并标记。 （1）免疫低下模型建立：实验第 1d 至第 7d，模型组及各治疗组采用腹腔注射 20mg/mL 的 CTX 注射液，按 40mg/kg，首次加倍，隔天 1 次，连续 4 次的造模方 法，正常对照组用等体积的生理盐水代替。 （2）动物给药：第 1d 至第 21d，药物治疗组在免疫抑制同时分别给予不同剂量 人参益元药液灌服，高剂量组 2.88g/kg，中剂量组 1.44 g/kg ，低剂量组 0.72 g/kg ，灌胃体积均为 10 mL/kg ，灌胃 1 次/日，正常对照组和模型组大鼠每天 予等量蒸馏水灌胃。 （3）检测指标。 ①流式细胞术检测外周血中 CD3+、CD4+；（每组 8 只） ②ELISA 法检测外周血相关免疫细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素- γ(IFN-γ) 含量；（每组 8 只） ③Western blot 检测脾组织 TNF-α蛋白的表达；（每组 3 只） ④外周血淋巴细胞(PBMC)的测定全自动血液分析仪检测白细胞(WBC)、血小板 (PLT)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)及淋巴细胞(PBMC)。（每组 8 只） 费用： 测试加工费：***** 实验结果以报告形式提供，提供所试剂仪器等信息，数据形成表 格以及 PRISM 软件绘制的柱状图，病理图等，可提供分析软件的文件， 用以后期自由调整结题材料和论文的图信息 | ||
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